商品介紹:
PU-H71是Hsp90抑制劑,IC50為50nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):873436-91-0 純度:98.85% 分子量:512.37 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Hsp90抑制劑(PU-H71) | PU-H71 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蠟狀芽孢桿菌小鼠糖原磷化同工IIAnti-SERINC1 Antibody人血清淀粉樣蛋白P(SAP)
解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種人抗磷脂抗體Anti-SERINC2 Antibody人甘露糖凝集受體(MBLR)
氣傳原小單孢菌小鼠糖原磷化同工MMAnti-SERINC3 Antibody人甘露糖凝集受體(MBLR)
棒彎孢大鼠Ⅲ型膠原Anti-SERPINB12 Antibody人纖溶/纖維蛋白溶(PL/Fbn)
禽腦脊髓炎病人抗組蛋白抗體Anti-SERPINA11 Antibody人纖溶/纖維蛋白溶(PL/Fbn)
硝鹽還原菌抗髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白(人)Anti-SERINC3 Antibody人B受體(BCR)
大腸埃希氏菌人晶體蛋白αAnti-SERPINA1 Antibody人B受體(BCR)
孢曲霉大鼠C反應(yīng)蛋白Anti-SERPINB3 Antibody人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)
構(gòu)巢曲霉小鼠糖原磷化同工BBAnti-SERPINB4 Antibody人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)
枯草芽孢桿菌大鼠組織多肽抗原Anti-SERPINE1 Antibody人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)
白囊耙齒菌小鼠甲狀腺抗體Anti-SERPIND1 Antibody人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)
戊糖乳桿菌人晶體蛋白βAnti-SESN1 Antibody人殺傷免疫球蛋白樣受體(KIR)
豬鏈球菌人抗膠原蛋白抗體Anti-SERPING1 Antibody人殺傷免疫球蛋白樣受體(KIR)
黑曲霉大鼠組織型纖溶原激活劑Anti-SETDB2 Antibody人殺傷凝集樣受體(KLR)
乳酒假絲酵母小鼠抗促甲狀腺受體抗體Anti-SF3B6 Antibody人殺傷凝集樣受體(KLR)
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum小鼠兒茶Anti-SESN1 Antibody人活化蛋白C(APC)
p53誘導(dǎo)蛋白5抗體虎掌菌15B8
UNC80蛋白抗體丁香假單胞桿菌番茄致病變種19A4
突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5抗體葡萄生鏈格孢TBEF3
β-taxilin蛋白抗體樺褐孔菌6B8D11H12
Hsp90抑制劑(PU-H71)褐革 巨大戟-3-O-當(dāng)歸酸酯
白靈側(cè)耳 當(dāng)歸酸酐
塔賓曲霉 L-色
羽扇豆根瘤 當(dāng)歸酸
鏈孢囊 CBZ-L-蘇
短小克銀漢霉 皂皮酸
假單胞屬 商陸酸
青黃馬杜放線 介芬
鞘氨單胞 甜菊
北里胞 山竹子
東方伊薩酵母 異桑葉生物堿
沉積物疣孢 依洛替康
枯草芽孢桿 洋地黃苷
谷棒桿 纖精酮
百合棒桿 BOC-L-蘇