商品介紹:
Astragalus polysaccharide是黃芪多糖提取物中的一種活性成分,能夠激活3T3-L1脂肪細胞中的PPAR-γ和PI3K/Akt。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 別名:Astragalus Polysacharin 純度:98.0% 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
土荊皮乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2'-Deoxyguanosine monohydrate透明質(zhì)合成3抗體包裝250mg
土壟大白蟻巢(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2'-Deoxycytidine;2'-dC熱休克蛋白56抗體包裝1g
土木香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2'-Deoxycytidine;2'-dC熱休克蛋白70相互作用蛋白抗體包裝5g
土木香內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2'-Deoxyadenosine monohydrate熱休克蛋白相關(guān)蛋白4抗體包裝100g
土牛膝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DNA, Fishsperm透明質(zhì)合成2抗體包裝25g
兔耳草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DNA from salmon sperm 同源盒基因HOXA3蛋白抗體包裝5g
菟絲子(南方菟絲)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Fluoro-2'-deoxycytidine同源盒基因HOXA4蛋白抗體包裝1g
蛻皮激(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Fluoro-2'--deoxyuridine同源盒基因HOXA6蛋白抗體包裝25g
脫落(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Guanosine同源盒基因HOXA7蛋白抗體包裝5g
脫氫齒孔英文名稱: Guanosine羥基類固(17β)脫氫4/17β-HSD4抗體包裝1g
脫氫紫堇堿;去氫紫堇堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GDP Disodium Salt血紅蛋白ζ鏈/Hemoglobin ζ 抗體包裝100g
脫穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SU-11274血紅結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
脫穿心蓮內(nèi)酯琥珀半酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Uridine血紅蛋白α抗體包裝500g
脫羊藿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Uridine結(jié)合球蛋白β抗體包裝100g
脫氧熊果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: UTP, Trisodium Salt海馬豐富基因轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體包裝25g
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品免疫球蛋白重鏈可變區(qū)試劑盒遼東楤木皂苷Ⅹ;Araloside X
三隔鐮刀菌Gibberella│tricincta El-Gholl McRitchie Schoult. & Ridings 質(zhì)量規(guī)格:>99%免疫球蛋白重鏈試劑盒硫辛;Lipoic acid
鏈孢囊菌Streptosporangium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品免疫球蛋白輕鏈lambda試劑盒羅丹明B;Rhodamine B
PPAR-γ和PI3K/Akt激活劑乙酰肝2抗體松蘿(標(biāo)準(zhǔn)品) Proteinase K
人血清抗體松蘿;D-地衣(標(biāo)準(zhǔn)品) Proteinase K
血紅氧合 1/熱休克蛋白32抗體松塔(標(biāo)準(zhǔn)品) Chymostatin
磷化HER3受體抗體松葉(標(biāo)準(zhǔn)品) Leupeptin
磷化組蛋白去乙酰化4/5/7抗體松脂二葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Pepstatin A microbial
異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體松脂;松脂酚,松脂(標(biāo)準(zhǔn)品) L-(-)-Fucose
組蛋白H1抗體松脂二 Pectinase
組蛋白去乙?;?/span>1抗體蘇合香(標(biāo)準(zhǔn)品) beta-Amylase
HAUS3蛋白抗體蘇木(標(biāo)準(zhǔn)品) beta-Amylase