以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
α-glucosidase I抑制劑 | Celgosivir hydrochloride | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Celgosivir hydrochloride(MDL28574A)是α-葡萄糖苷酶I(α-glucosidase I)抑制劑,在體外實驗中的IC50值為1.27μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:141117-12-6 別名:MDL 28574A 純度:98.0% 分子量:295.76 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
脫氧野尻霉(標準品)英文名稱: E64d,E-64d組蛋白H2AZ抗體包裝5g
拓撲替康鹽鹽(標準品)英文名稱: dCMP,2Na熱休克因子2結(jié)合蛋白抗體包裝1g
瓦松(標準品)英文名稱: 2'-Deoxyadenosine 5'-monophosphateHEATR2蛋白抗體包裝1g
萬丈深(標準品)英文名稱: FAD-Na2鐵硫簇整合同源物2蛋白抗體包裝25g
萬丈深(綠莖還陽參)(標準品)英文名稱: GTP, 3sodium Salt麻疹病血凝抗體包裝5g
王不留行(標準品)英文名稱: 5-IMP,2Na同源盒蛋白HOXC5抗體包裝1g
王不留行環(huán)肽A英文名稱: Uridine 5'-diphosphate sodium salt from 轉(zhuǎn)錄因子HES4抗體包裝5g
王不留行環(huán)肽B英文名稱: 5'-UMP-Na2造血干特異性相關(guān)結(jié)合蛋白3抗體包裝1g
王不留行黃苷(標準品)英文名稱: 2-Deoxyadenosine-5-Monophosphate Disodium salt(dAMP-Na2)HDHD1蛋白抗體包裝5g
威靈仙(綿團鐵線蓮)(標準品)英文名稱: 5'-ATP-Na2HDHD2蛋白抗體包裝100g
威靈仙(標準品)英文名稱: (YN968D1)宿主因子1抗體包裝25g
維采寧2英文名稱: cAMP組蛋白H2A/S抗體包裝5g
維生B2(標準品)英文名稱: cAMP組受體H2抗體包裝100g
維生D2(標準品)英文名稱: Cytidine 5'-monophosphate 磷化組受體H1抗體包裝25g
維斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-...英文名稱: 5-Formylsalicylic acid同源盒蛋白HOXA11抗體包裝5g
黃孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于培養(yǎng)免疫球蛋白輕鏈kappa試劑盒六氫吡啶羧;DL-Pipecolini
大腸埃希氏菌DH5a/pBAD-MyC-HisC/PasecA N236HEscherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品免疫球蛋白結(jié)合蛋白試劑盒絡(luò)塞維;Rosavin
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格:>98%免疫球蛋白γ-1 鏈C 區(qū)試劑盒諾米林;nomilin
α-glucosidase I抑制劑乙?;M蛋白H2B抗體異土木香內(nèi)酯(標準品) N6-Cbz-L-Lysine
磷化組蛋白H2AX抗體異夏佛塔苷(標準品) Esmolol HCl
磷化熱休克蛋白27抗體異型南五味子?。藴势罚?Esmolol HCl
磷化熱休克蛋白70抗體異櫻花;異櫻花亭(標準品) H-Met-OtBu·HCl
磷化熱休克因子1抗體異澤蘭黃(標準品) Maltitol
磷化熱休克因子1抗體異紫花前胡內(nèi)酯 L-Threonine methyl ester hydrochloride
磷化熱休克蛋白70抗體益母草(標準品) Ac-Trp-Oet
E3泛蛋白連接HACE1抗體益智(益智仁)(標準品) N-Acetyl-DL-tryptophan
結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體益智(標準品) Nalpha-Formyl-DL-tryptophan