c-Met信號(hào)通路抑制劑（c-Met inhibitor 1）

c-Met信號(hào)通路抑制劑（c-Met inhibitor 1）公司*的產(chǎn)品：Anti-phospho c-Raf/RAF1(pSer338/pTyr340)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化原癌基因c-raf抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Mouse Anti-Bovine IgG 小鼠抗IgG (親和層析純化)Multi-class antibodie

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：c-Met信號(hào)通路抑制劑（c-Met inhibitor 1）

英文名稱：c-Met inhibitor 1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

大腸埃希菌Saccharomyces cerevisiae

綠孢環(huán)柄菇Saccharomyces cerevisiae

間座殼屬Pseudozyma hubeiensis

煙灰離褶傘Pseudozyma shanxiensis

藤黃微球菌Saccharomyces cerevisiae

無Pseudozyma shanxiensis

黑根霉Candida pseudolambica

假單胞菌屬Saccharomyces cerevisiae

新硬毛革耳Saccharomyces cerevisiae

互生毛霉Saccharomyces cerevisiae

南方散斑殼Saccharomyces cerevisiae

蠟狀芽孢桿菌Rhodotorula glutinis

灰色鏈霉菌Saccharomyces cerevisiae

繩狀籃狀菌Saccharomyces cerevisiae

檸檬兩面神菌Saccharomyces cerevisiae

淺紫灰鏈霉菌Saccharomyces cerevisiae

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒抗凝血3抗體人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu) 牛磺

小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)免疫試劑盒人血清白蛋白單克抗體人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu) ?；切苋パ跄?/span>

小鼠骨保護(hù)(OPG)免疫試劑盒載脂蛋白A4抗體人抗DNAB抗體(anti-DNase B) 牛膝甾

小鼠過氧化(GSH-Px)免疫試劑盒磷化Rho鳥苷交換因子2抗體人抗DNAB抗體(anti-DNase B) 牛血清白蛋白V
c-Met信號(hào)通路抑制劑（c-Met inhibitor 1）srGAP3 英文名稱： 精神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體 0.1ml

epithelial Sodium Channel gamma 英文名稱： 上皮鈉離子通道蛋白γ/γENaC抗體 0.2ml

突觸相關(guān)膜蛋白25抗體 Anti-SNAP-25 0.1ml

Anti-TFPI-2/FITC 熒光素標(biāo)記組織因子途徑抑制劑-2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAPKAPK5(Ser93) 磷酸化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg