IGF-1R抑制劑（NVP-ADW742）

IGF-1R抑制劑（NVP-ADW742）公司正在出售的產(chǎn)品：p-VEGFR2/FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgG
FLT-3/CD135/FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠FMS樣酪氨激3IgG
Phospho-FLT3 (Tyr591) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化FMS樣酪氨激3IgG
Phospho-FLT3 (Tyr589/591) /F

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
草本枝孢Bacillus sp.大鼠血管生長(ANG)

芽胞桿菌屬Bacillus sp.大鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)

嗜根考克氏菌Aeromonas sp.大鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)

假蜜環(huán)菌Halobacillus sp.大鼠(cAMP)

根瘤菌Plesiomonas sp.大鼠(cAMP)

豌豆根瘤菌Pseudomonas pseudoalcaligenes大鼠(cAMP)

東方伊薩酵母Plesiomonas sp.大鼠(cAMP)

草青霉Pseudomonas solanacearum大鼠白活化黏附因子(ALCAM)

釀酒酵母Bacillus subtilis subsp. subtilis大鼠白活化黏附因子(ALCAM)

腸沙門氏菌腸亞種嬰兒血清型Staphylococcus saprophyticus大鼠白介9(IL-9)

葡萄糖桿菌屬Bacillus thuringiensis大鼠白介9(IL-9)

熱帶假絲酵母Bacillus cereus大鼠巨噬移動抑制因子(MIF)

腸沙門氏菌腸亞種伊斯特本血清型Blastochloris sp.大鼠巨噬移動抑制因子(MIF)

相思根瘤菌Halobacillus sp.大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)

釀酒酵母Aeromonas sp.大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)

寬雄腐霉Aeromonas sp.大鼠孕激/孕(PROG)

破傷風(fēng)毒重鏈抗體平凡假單胞菌鴨疫里氏桿菌

內(nèi)皮B受體抗體金黃節(jié)桿菌乳房鏈球菌

線粒體硫氧還蛋白2抗體硝基癒瘡木膠節(jié)桿菌氏桿菌

Toll樣受體7抗體死谷芽孢桿菌牛溶血鏈球菌
IGF-1R抑制劑（NVP-ADW742）球孢白僵 甲殼

弓形蟲(GT0－2株) 木聚糖

山西黑粉 麥芽糖一水合物

博伊丁假絲酵母 麥芽糖

紫穗槐根瘤 脂多糖

解脂假絲酵母解脂變種 昆布多糖

平田頭菇1-2 昆布多糖

釀酒酵母 D-山梨

臭曲霉 L-山梨糖

粟酒裂殖酵母 蔗糖

異角狀盤多毛孢 海藻酸

Bacillus 海藻酸鈉

汞速測盒  海藻糖

 D-海藻糖

葡萄座腔 D-半乳糖