PKR抑制劑（Mitapivat）

PKR抑制劑（Mitapivat）公司*的產(chǎn)品：HSP-70/RBITC 羅丹明標(biāo)記熱休克蛋白-70抗體IgG
VHL/FITC 熒光標(biāo)記一種腫瘤抑制因子抗體IgG
Vimentin/FITC 熒光標(biāo)記波形蛋白抗體IgG
Vimentin/Cy3 熒光Cy3標(biāo)記波形蛋白抗體IgG
VIP/FITC 熒光標(biāo)記血管活性腸肽抗體蛋白抗體IgG
Visfatin-1/PBEF1(NT)/

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：PKR抑制劑（Mitapivat）

英文名稱：Mitapivat

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

燼灰吸水鏈霉菌Bacillus sp.大鼠孕激/孕(PROG)

腐殖質(zhì)類芽胞桿菌Halobacillus sp.大鼠雌激(E)

葡萄座腔菌Aeromonas sp.大鼠雌激(E)

松鼠葡萄球菌松鼠亞種Halobacillus sp.大鼠血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)

米曲霉Bacillus sp.大鼠血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)

總狀共頭霉Paenibacillus sp.大鼠白介8(IL-8/CXCL8)

凍干粉  克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）（陽性） Aeromonas sp.大鼠白介8(IL-8/CXCL8)

光滑青霉Gluconobacter sp.大鼠脂聯(lián)(ADP)

大腸埃希氏菌Bacillus sp.大鼠脂聯(lián)(ADP)

微黃棒桿菌Bacillus sp.大鼠游離β絨毛膜促性腺激(f-βCG)

灰離褶傘(松毛菇)Bacillus sp.大鼠游離β絨毛膜促性腺激(f-βCG)

宇佐曲霉Bacillus sp.大鼠固(ALD)

大腸埃希氏菌Aeromonas sp.大鼠固(ALD)

假單胞菌屬Bacillus sp.大鼠去甲腎上腺(NA)

釀酒酵母Pseudomonas sp.大鼠去甲腎上腺(NA)

油菜假單胞菌Bacillus sp.大鼠前列腺F(PGF)

睪丸特異定蛋白質(zhì)編碼Y1抗體托氏假單孢菌山羊葡萄球菌

腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白4抗體解淀粉類芽孢桿菌豬葡萄球菌

腫瘤壞死因子受體相互作用蛋白抗體寡養(yǎng)單胞菌洲馬瘟病毒（VI型）

微管蛋白βtubulin抗體Tubulinβ泛菌洲馬瘟病毒（IX型）
PKR抑制劑（Mitapivat）香菇—蘇香 乳果糖

乳桿屬 乳糖酸

貝倫格葡萄座腔 乳糖

忽視擬盤多毛孢 凝膠多糖

釀酒酵母 糖原

E.coli DH5α β-谷甾

大腸埃希氏(大腸桿) 膽固

煙曲霉 木糖

小平菇（秀珍菇） D-木酮糖

樟疫霉 D-(+)-木糖

草酸青霉 烏來糖

枯草芽胞桿 加拿大樹膠

堿土氣微 阿伯樹膠粉

地生翅孢殼 D(+)-阿伯糖

假單胞 L-阿伯糖