商品介紹:
Forskolin是一種有效的腺苷酸環(huán)化酶激活劑,結(jié)合到I型腺苷酸環(huán)化酶IC50為41nM,激活I(lǐng)型腺苷酸環(huán)化酶,EC50為0.5μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:66575-29-9 別名:Coleonol;Colforsin 純度:98.60% 分子量:410.5 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-(標(biāo)...英文名稱: Chitin磷化Ephrin B抗體包裝5g
4'-去鬼臼英文名稱: Coenzyme A, free acid, hydrate (COA)磷化Ephrin B抗體包裝5mg
4'-去氧基表鬼臼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Paclobutrazol磷化雌激受體α抗體包裝5g
4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基呫噸英文名稱: Hydrazine sulfate磷化雌激受體α抗體包裝25g
4-基傘形-β-D-木糖苷英文名稱: Polyphenol Oxidase from Mushrooms表皮生長因子受體底物8抗體包裝1g
4-羥基喹唑啉英文名稱: Copper(II) sulfate, pentahydrate內(nèi)皮1抗體包裝1g
4-硝基兒茶酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-Acetyl-D-glucosamine腸道病71型/手足口病病抗體包裝5g
4’-O-基補骨脂查爾B英文名稱: Manganous sulfate monohydrate絲裂原活化蛋白激1抗體包裝25g
4β-羥基黃芪紫檀烷苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rubidium chloride絲裂原活化蛋白激3抗體包裝5g
5,7,4'-三羥基-8-基二氫黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Poly-L-lysine雌激受體α抗體包裝25g
5,7-二羥基色原英文名稱: Span* 80雌激受體β 抗體包裝5g
5-O-基維斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-...英文名稱: PEG 1000上皮特異性抗原抗體包裝100g
5-O-基維斯阿米苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tryptone內(nèi)皮-1抗體包裝25g
5-羥基糠(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DNSCl, Dansyl chloride天冬蛋白家族蛋白抗體包裝100g
5-羥色(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-Ethylmaleimide蝮蛇蛇蛋白抗體包裝25g
油污染土鞘菌Sphingobium│olei 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,A型羧化基質(zhì)谷蛋白試劑盒人參炔;Falcarinol,Pana
猴頭菇Hericium│erinaceus (Bull.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品羧化不全骨鈣試劑盒肉豆寇單甘油酯;Monomyristi
鮑曼/醋鈣復(fù)合不動桿菌Acinetobacter│baunannii/calcoaceticus complex 質(zhì)量規(guī)格:>99%,可用于培養(yǎng)髓樣分化因子88試劑盒肉豆蔻甘油三酯;Tritetradec
腺苷酸環(huán)化酶激活劑(Forskolin)鋅指蛋白437抗體橡精 DATISCETIN(SH)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白415抗體瑞香-7- DAPHNETIN-7-METHYLETHER(RG)Human
鋅指蛋白46抗體13-卡芭亭 I DEACETYLTAXCHININ I, 13-(SH)Human, Mouse
鋅指蛋白93抗體DEACETYLSALANNIN, 3-(P)Human
鋅指蛋白568抗體DEACETYLSALANNIN, 3-(P)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白473抗體DEACETYL-4-TIGLOYLCHAMISSONOLIDE, 2-(SH)Human, Mouse
AN1型鋅指蛋白5抗體DEACETYL-4-TIGLOYLCHAMISSONOLIDE, 2-(SH)Human, Mouse
鋅指蛋白146抗體7-表-10-去乙酰云南紫杉寧 A DEACETYLTAXOL, 7-EPI-10-(SH)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白23抗體10-去乙酰漿果赤霉 V DEACETYLBACCATIN V, 10-(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat