公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱(chēng):RSK抑制劑(LJH685)
英文名稱(chēng):LJH685
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
LJH685是一種有效的選擇性RSK抑制劑,抑制RSK1/2/3生物活性,IC50為4到13nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1627710-50-2 分子量:381.42 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
腸沙門(mén)氏菌浩敦亞種人雄激結(jié)合蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)
黃色孢鏈霉菌人抗滋養(yǎng)膜抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雌二受體(ER)
香菇(Cr62)人抗透明帶抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雌二受體(ER)
雪葉擬盤(pán)多毛孢人抗卵巢抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠半乳糖6硫酯(Gal-6S)
豬丹絲菌人抗巨病抗體IgGBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠半乳糖6硫酯(Gal-6S)
普通變形菌人堿性胎兒蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)
馬沙門(mén)氏菌陽(yáng)性血清人抗風(fēng)疹病IgM抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)
淺絳紅鏈霉菌人催產(chǎn)Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠(LPA)
地衣芽孢桿菌人相關(guān)血漿蛋白ABacillus subtilis subsp. subtilis小鼠(LPA)
雞傷寒沙門(mén)氏菌人抗內(nèi)膜抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)
拜氏不動(dòng)桿菌人抗抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)
韓國(guó)游動(dòng)微菌人皰疹抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)
無(wú)花果曲霉人胎盤(pán)生長(zhǎng)因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)
楊樹(shù)莖點(diǎn)霉人凝血Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)
柯柯鹽湖枝芽孢桿菌人ⅦBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)
米根霉人可溶性白抗原GBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠apelin 12(AP12)
鋅指蛋白321B抗體云芝小鼠L細(xì)胞
內(nèi)臟異位相關(guān)蛋白/鋅指蛋白203抗體蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種山羊皮膚成纖維樣細(xì)胞
鋅指蛋白Zdhhc18抗體茯苓豬睪丸細(xì)胞
鋅指蛋白Zdhhc12抗體灰樹(shù)花人外周血B細(xì)胞
RSK抑制劑(LJH685)澳型核果褐腐病 甘松新酮
群結(jié)腐霉 曙紅Y(水溶)
粘著劍 曙紅B
明尼蘇打沙門(mén)氏 毛蘭
蒼黃擬無(wú)枝酸 天狼星紅BB
腸桿屬 虎紅
萊比托游動(dòng)球 剛果紅
黑曲霉 甲基紅鈉
南方靈芝 甲基紅
珊瑚色諾氏 中性紅
枯草芽孢桿 中性紅
不等彎孢 山麥冬皂苷B
斑玉蕈 四氮唑藍(lán)
藤黃淺藤黃鏈霉 乙酰車(chē)前草酸甲酯
新疆薄層 四氮唑紫