中性紅染色液(液泡系專用)

中性紅染色液(液泡系專用)公司正在出售的產(chǎn)品：VEGF-D 血管內(nèi)皮生長因子D型抗體1,2,4,5-四 95%
VEGFR1 血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體1,2,4,5-四 NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品，99.8%(GC)
VEGF Receptor 2/VEGFR2 血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體1,2,3-苯 91%
phospho-VEGF receptor 2 (Tyr951) 化血管內(nèi)皮生長因子受

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
松蘿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Proteinase K乙酰肝2抗體包裝5g

松蘿；D-地衣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Proteinase K人血清抗體包裝1g

松塔（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Chymostatin血紅氧合 1/熱休克蛋白32抗體包裝5g

松葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Leupeptin 磷化HER3受體抗體包裝1g

松脂二葡萄糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pepstatin A microbial磷化組蛋白去乙?；?/5/7抗體包裝1g

松脂;松脂酚,松脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-(-)-Fucose 異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體包裝100g

松脂二英文名稱： Pectinase組蛋白H1抗體包裝25g

蘇合香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： beta-Amylase組蛋白去乙?；?抗體包裝5g

蘇木（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： beta-AmylaseHAUS3蛋白抗體包裝25g

漿苦味L（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Deoxyribonuclease熱休克蛋白93抗體包裝5g

棗仁（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Taka-Diastase from Aspergillus oryzae 磷化組蛋白去乙?；?抗體包裝25g

棗仁皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Taka-Diastase from Aspergillus oryzae 組蛋白H2B抗體包裝5g

棗仁皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase短鏈L-3羥烷基脫氫抗體包裝1g

蒜（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Bromelain from pineapple stem 組蛋白去乙?；?抗體包裝5g

穗花杉雙黃（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thiamine pyrophosphate組蛋白去乙?；?0抗體包裝1g

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于培養(yǎng)膜聯(lián)蛋白Ⅶ試劑盒化矢車菊;Cyanidin Chlo

成對桿菌Dyadobacter│alkalitolerans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品膜聯(lián)蛋白Ⅵ試劑盒酪;4-Hydroxyphenethy

蓋孔菌Filoboletus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR膜聯(lián)蛋白Ⅴ試劑盒胡黃連苷III;Picroside II
中性紅染色液(液泡系專用)大腸埃希 2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡啶鹽酸鹽氨酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa

芽孢桿屬 1,7-庚二腱調(diào)蛋白Elisa

科氏葡萄球 4-叔丁基苯磺酰偶對蛋白Elisa

釀酒酵母 8-喹啉酸Synerginγ蛋白Elisa

楊生盾殼霉 苯基胍碳酸鹽Strabismus蛋白Elisa

季也蒙假絲酵母季也蒙變種 己酸-2-苯乙酯Stomatin蛋白Elisa

麥根腐平臍蠕孢 已二酰二監(jiān)理蛋白Elisa

梨黑斑鏈格孢 2,4-二氟-α-(1H-1,2,4-三唑基)乙酰苯14-3-3蛋白etaElisa

松口蘑 2-氯-3-氟異煙酸碳酸酐3Elisa

暗黃紫色小單孢 二乙二二乙酸酯碳酸酐9Elisa

釀酒酵母 9,10-蒽二酸二頻哪酯碳酸酐4Elisa

Arenibacter troitsensis  4-氯苯酮碳酸酐5Elisa

卷枝毛霉卷枝變型 2-基丁二酸二甲酯碳酸酐7Elisa

串珠皮狀新絲孢酵母 二甲酰肼碳酸酐8Elisa

鞘氨單胞屬 環(huán)沙星高溫需求因子A1Elisa