詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
GI254023X | 1mL(10mM)|5mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GI254023X是一種有效的MMP9和ADAM10抑制劑,IC50s分別為2.5和5.3nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:260264-93-5 別名:GI4023;SRI028594 純度:99.67% 分子量:391.5 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
乳桿菌屬Paenibacillus polymyxa
蘇云金芽孢桿菌Bacillus licheniformis
泡盛曲霉Paenibacillus polymyxa
短桿狀馬賽菌Paenibacillus polymyxa
屎腸球菌Paenibacillus polymyxa
細黃鏈霉菌Paenibacillus polymyxa
釀酒酵母Paenibacillus polymyxa
黑曲霉Paenibacillus polymyxa
釀酒酵母Bacillus licheniformis
白囊耙齒菌Paenibacillus macerans
凍干粉 金黃色葡萄球菌(定量) Bacillus coagulans
葡萄穗霉Bacillus coagulans
秦氏蜜環(huán)菌Paenibacillus polymyxa
雞腿菇Paenibacillus macerans
薄邊蜂窩菌Paenibacillus macerans
半軟干酪居真菌細菌Bacillus subtilis
磷化Rho相關蛋白激1抗體食多種樹脂假單胞菌厭鹽假諾氏菌
磷化RNA聚合IICTD抗體桿菌燕麥細鐮孢霉
磷化Raf激抑制蛋白抗體土壤桿菌雪狀白僵菌
磷化RhoGTP激活蛋白GAP抗體棲木假單胞菌雪腐鐮孢
MMP9和ADAM10抑制劑(GI254023X)mSin3A 英文名稱: 同源轉錄調節(jié)蛋白Sin3A抗體 0.2ml
EPOR 英文名稱: 紅細胞生成素受體抗體 0.1ml
新的抑癌基因Brg1抗體 Anti-Brg1 0.1ml
Anti- Beta-Actin/HRP 辣根過氧化物酶標記β-肌動蛋白(抗體)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539) 磷酸化干擾素α受體抗體 規(guī)格 0.1ml
Cav-1/ETM1 peptide 細胞質膜微囊蛋白-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg