PAK1變構(gòu)抑制劑(NVS-PAK1-1)

PAK1變構(gòu)抑制劑(NVS-PAK1-1)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-PEG10 /FITC 熒光素標(biāo)記肝癌高表達(dá)基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-human IgA/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml
原活化蛋白激酶3抗體 Anti-MAPK1/ERK3

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
弗雷德里克斯堡假單胞菌Citrobacter koseri

枯草芽孢桿菌Clavibacter fangii

短小芽孢桿菌Clavibacter fangii

青枯假單胞菌Clavibacter michiganensis subsp. insidiosus

解淀粉芽孢桿菌Clavibacter fangii

冷海水黃桿菌Clostridium amylolyticum

死亡谷芽孢桿菌Clavibacter michiganensis subsp. michigane

多主殼Clostridium acetobutylicum

大腸埃希菌Clostridium acetobutylicum

紫色鏈霉菌Cloacibacterium rupense

金黃回旋鏈霉菌Clostridium beijerinckii

空腸彎曲桿菌Clostridium tetanomorphum

乙型副傷寒沙門氏菌Cohaesibacter marisflavi

假單胞菌屬Colwellia aestuarii

樹舌靈芝Colwellia chukchiensis

古巴栓孔菌Comamonas testosteroni

小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)免疫試劑盒雄激受體抗體人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP) 粉防己堿

小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱蛋白激活抑制劑)人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP) 風(fēng)信子

小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)免疫試劑盒軸蛋白1抗體人食欲/阿立新B(OX-B)蜂斗菜內(nèi)酯A

小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)免疫試劑盒自噬相關(guān)蛋白9B抗體人食欲/阿立新B(OX-B)佛手柑內(nèi)酯
PAK1變構(gòu)抑制劑(NVS-PAK1-1)SHC 英文名稱： SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 0.2ml

phospho-eIF4EBP1 (Thr37 + Thr46) 英文名稱： 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml

膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體 Anti-CD46/MCP/membrane cofactor protein 0.1ml

Anti-VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GluR1(Ser836) 磷酸化谷氨酸受體1抗體 規(guī)格 0.1ml

CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) 周期素依賴性激酶6抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg