以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Eugenol是丁香中發(fā)現(xiàn)的精油,具有抗菌,驅(qū)蟲(chóng)和抗氧化活性。Eugenol也可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):97-53-0 純度:99.86% 分子量:164.2 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
酯封端左旋聚乳(重均分子量137-170萬(wàn))英文名稱: Nordihydrocapsaicin抑瘤M抗體包裝5g
酯封端左旋聚乳(重均分子量17-26萬(wàn))英文名稱: 4-(Methylamino)-antipyrine抑瘤M受體抗體包裝25g
酯封端左旋聚乳(重均分子量170-206萬(wàn))英文名稱: Hydrazine sulfate鋅指蛋白339抗體包裝5g
酯封端左旋聚乳(重均分子量206-288萬(wàn))英文名稱: Hydrazine sulfate氧氣調(diào)節(jié)蛋白150抗體包裝1g
酯封端左旋聚乳(重均分子量26-36萬(wàn))英文名稱: Cyclandelate氧化應(yīng)激反應(yīng)蛋白1抗體包裝1g
酯封端左旋聚乳(重均分子量3-5.5萬(wàn))英文名稱: Nitrilotriacetic acid固生蛋白M抗體包裝5g
酯封端左旋聚乳(重均分子量36-48萬(wàn))英文名稱: 1,3- Propylene Glycol末端多聚腺苷1蛋白抗體包裝1g
酯封端左旋聚乳(重均分子量48-73萬(wàn))英文名稱: Diethylene Glycol嗅球蛋白3抗體包裝5g
酯封端左旋聚乳(重均分子量5.5-9 萬(wàn))英文名稱: Chlorothiazide轉(zhuǎn)錄因子OTX1抗體包裝1g
酯封端左旋聚乳(重均分子量73-102萬(wàn))英文名稱: 4-amino-6-chloro-1,3-benzenedisulfonamide轉(zhuǎn)錄因子OTX2抗體包裝1g
酯封端左旋聚乳(重均分子量9-17萬(wàn))英文名稱: Alkene轉(zhuǎn)錄因子OTX1+OTX2抗體包裝250mg
(3R,4R)-N,4-二基-1-(基)-3-...英文名稱: N-Methylparoxetine增食欲B/欲激B包裝5g
(R)-1-基-3-基丁基蒎烷二酯鹽鹽英文名稱: Sevoflurane鳥(niǎo)脫羧抗體包裝100mg
1,2-二基-5-羥基-3-吲哚乙酯;美卡比酯;英文名稱: DiaveridineO位N-乙酰葡萄糖OGT抗體包裝25mg
1,9-吡唑并蒽;SP600125英文名稱: Mestanolone少突膠質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子1包裝25g
淺黃新薩托菌Neosartorya│aureola 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定肌抑試劑盒百蕊草I;Kaempeerol-3-O
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR肌養(yǎng)蛋白試劑盒白蠟樹(shù);Dimethylfraxeti
扣囊復(fù)膜孢酵母Saccharomycopsis│fibuligera 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品肌生成試劑盒白花前胡;Ulopterol
脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑(Eugenol)豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍(lán)耳病病抗體鹽噻/泊酚雜質(zhì)J Retrorsine
凋亡相關(guān)蛋白10抗體鹽 Rhodamine B base
鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激磷抗體鹽氧普 Rhodanine
絲/蘇蛋白激PIM3抗體鹽氧那明 S-Acetylthiocholine iodide
組蛋白精轉(zhuǎn)移5抗體鹽金剛烷 S-Acetylthioglycolic acid N-hydroxysuccinimide ester
原鈣粘附蛋白11X抗體鹽金剛乙 Salicyl alcohol
原鈣粘附蛋白11Y抗體鹽雷洛昔芬 SB3-18
原鈣粘附蛋白12/血管內(nèi)皮鈣粘蛋白2抗體鹽雷莫司瓊 Selenium (IV) oxide
原鈣粘附蛋白17抗體鹽雷尼替丁 Sesamol