Pim-1激酶抑制劑（TCS PIM-1 1）

Pim-1激酶抑制劑（TCS PIM-1 1）公司正在出售的產(chǎn)品：PR/FITC 熒光標(biāo)記孕激受體抗體IgG
pRb/p105-Rb /FITC 熒光標(biāo)記化成視網(wǎng)膜瘤抑癌蛋白抗體IgG
PRCP/FITC 熒光標(biāo)記脯氨酰羧肽抗體IgG
Rb/RB1 protein/FITC 熒光標(biāo)記視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體IgG
Phospho-Rb (Ser608) /FITC 熒光標(biāo)記化視網(wǎng)膜母瘤相

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
牛摩氏菌Escherichia coli大鼠D-乳脫氫(D-LDH)

FlavobacteriumEscherichia coli大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)

漢遜德巴酵母Escherichia coli大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)

盤長孢狀盤孢Escherichia coli大鼠膽固(CH)

白鱗蘑菇Escherichia coli大鼠膽固(CH)

乳乳球菌乳亞種Escherichia coli大鼠甘油三酯(TG)

唾液乳桿菌Escherichia coli大鼠甘油三酯(TG)

梭形凸臍蠕孢Escherichia coli大鼠低密度脂蛋白(LDL)

毛霉Escherichia coli大鼠低密度脂蛋白(LDL)

香菇Escherichia coli大鼠高密度脂蛋白(HDL)

黑曲霉Escherichia coli大鼠高密度脂蛋白(HDL)

傷口諾氏菌Escherichia coli大鼠孕受體(PGR)

米蘭鏈霉菌Escherichia coli大鼠孕受體(PGR)

粘滑菇屬Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅱ轉(zhuǎn)化(ACEⅡ)

松口蘑Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅱ轉(zhuǎn)化(ACEⅡ)

黑曲霉Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)

蛋白酪磷受體型4抗體桑木層孔菌人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞

6磷果糖激抗體氏針層孔菌小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

磷激1抗體勞埃德木層孔菌兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞

磷變位1抗體平滑木層孔菌新生牛眼晶體上皮細(xì)胞
Pim-1激酶抑制劑（TCS PIM-1 1）惡臭假單胞 液體硫乙酸鹽培養(yǎng)基

近弧狀短波單胞 L-天冬酰

釀酒酵母 L-天冬

土曲霉 皰肉牛肉粒

齊藤假絲酵母 L-蘇

阿舒假囊酵母 皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)

分枝節(jié)桿 L-絲

淺金鏈霉 多價蛋白胨-酵母膏（PY）培養(yǎng)基

西班牙弧 L-色

梅瑞狄斯氏靈芝 L-鼠李糖

產(chǎn)氣莢膜梭 C型 多粘B（1.2mg）

多量毛霉 茄尼

哈茨木霉 千層紙

黃傘 亞硫酸鹽-多粘-磺嘧啶瓊脂基礎(chǔ)

凍干粉  副溶血性弧（定量）  10-羥基癸烯酸