Src激酶抑制劑（AZM475271）

Src激酶抑制劑（AZM475271）公司*的產(chǎn)品：Anti-KEAP1/FITC 熒光素標記胞質(zhì)接頭蛋白Keap1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-ret IgG/Biotin 生物素化羊抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
抗Ⅵ型膠原抗體 Anti-Collagen Ⅵ 0.2ml
Mous

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：Src激酶抑制劑（AZM475271）

英文名稱：AZM475271

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細胞生物學研究有以下幾個方面：

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調(diào)控；

⑤細胞分化及其調(diào)控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

裂褶菌Halomonas sp.

大腸埃希氏菌Marinobacter sp.

擬莖點霉Corynebacterium ammoniagenes

細孢毛霉Microbacterium sp.

銅綠假單胞菌Halorubrum sp.

茶樹菇Halorubrum californiensis

乳桿菌屬Halorubrum sp.

Pilidium concavumHalorubrum sp.

沼澤紅菇Halorubrum sp.

UNNASH/DF-1 Flavobacterium cheniae

菌褶輪枝菌Enterococcus hirae

金黃硬皮馬勃Lactobacillus plantarum

熒光假單胞Flavobacterium sp.

玫煙色棒束孢Halomonas xianhensis

鏈霉菌Rhodococcus qingshengii

微黃原小單孢菌Sphingobacterium siyangensis

類芽孢桿菌Paenibacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

核盤菌Sclerotinia│sclerotiorum 質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測定

黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),標準品
Src激酶抑制劑（AZM475271）Salmonella enteritidis H 英文名稱： 傷寒沙門氏菌鞭毛抗原H抗體 0.2ml

ETS1 英文名稱： Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗體 0.1ml

蛋白激酶A抗體 Anti-PKA 0.1ml

Anti-STAT4 /FITC 熒光素標記信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MYF5 (phospho Ser49) 磷酸化生肌決定因子Myf5抗體 規(guī)格 0.1ml

GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4) GDNF家族受體α-4(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)