Smo抑制劑(Jervine)

Smo抑制劑(Jervine)公司*的產(chǎn)品：pre-X protein(NT)/FITC 熒光標(biāo)記抗肝病pre-X蛋白抗體（N端）IgG
pre-X protein(CT)/FITC 熒光標(biāo)記抗肝病pre-X蛋白抗體（C端）IgG
PRMT1/FITC 熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)精氨轉(zhuǎn)移1抗體IgG
ProADM (Adrenomedullin)-N20 peptide /FITC 熒光標(biāo)記腎上

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：Smo抑制劑(Jervine)

英文名稱：Jervine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

米根霉Escherichia coli大鼠血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)

香港洛克氏菌Escherichia coli大鼠促性腺激釋放激受體(GnRHR)

吉氏根瘤菌Escherichia coli大鼠促性腺激釋放激受體(GnRHR)

大腸埃希氏菌Escherichia coli大鼠磷化腺苷活化蛋白激(AMPK)

伍氏束縛菌Escherichia coli大鼠磷化腺苷活化蛋白激(AMPK)

根瘤菌屬Escherichia coli大鼠熱休克蛋白47(HSP47)

烏斯懷亞海單胞菌Escherichia coli大鼠熱休克蛋白47(HSP47)

雞早熟艾爾球蟲(LZ株)Escherichia coli大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激(GC)

絳紅鏈霉菌Escherichia coli大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激(GC)

拜耳接合酵母Escherichia coli大鼠檸檬合(CS)

Aurantimonas sp.Escherichia coli大鼠檸檬合(CS)

黑曲霉Escherichia coli大鼠L-鼠乳脫氫(L-LDH)  

福氏嗜冷桿菌Escherichia coli大鼠L-鼠乳脫氫(L-LDH)  

皺褶假絲酵母Escherichia coli大鼠脂酰合成(ACS)

藤倉鐮孢Escherichia coli大鼠脂酰合成(ACS)

牛肝菌Escherichia coli大鼠肉堿脂酰轉(zhuǎn)移(CACT)

外周二氮受體抗體金平木層孔菌CF-1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，經(jīng)射線處理，P3,100萬細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）

鞘脂激活蛋白原抗體黃白多年臥孔菌小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，經(jīng)射線處理，P3,300萬細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）

脯羥化2抗體刺槐多年臥孔菌人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞

肝再生磷酯1抗體角殼多年臥孔菌洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5B
Smo抑制劑(Jervine)產(chǎn)氨短桿 牛血清白蛋白V

黃曲霉 ?；悄懰徕c

環(huán)捕節(jié)叢孢小孢變種 檸檬烯

漏斗狀側(cè)耳（鳳尾菇） 沒食子酸酯

弗氏檸檬酸桿 蘆薈寧

摩洛哥芽孢桿 L-亮（白）

約氏不動(dòng)桿 L-酪

郎必可假絲酵母 L-賴鹽酸鹽

pDG1730 L-賴

水原馬賽 莰烯

澳型核果褐腐病 L-精鹽酸鹽

香栓 DL-精

釀酒酵母 花椒

釀酒酵母 D-果糖

構(gòu)巢曲霉 D-甘露糖