商品介紹:
GDC-0623是一種有效的,ATP競爭性的MEK1抑制劑,Ki值為0.13nM,對HCT116細胞中KRAS(G13D)的EC50值為42nM,而對A375細胞中BRAFV600E的EC50值為7nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1168091-68-6 純度:97.19% 分子量:456.21 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
MEK1抑制劑(GDC-0623) | GDC-0623 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
橙黃紅酵母大鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白Anti-Phospho Ras-GRF1 (Ser916) Antibody人FMS樣酪激3配體(Flt-3L)
米根霉小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成Anti-Phospho RPS6 (Ser244) Antibody人FMS樣酪激3配體(Flt-3L)
雅致放射毛霉大鼠血管緊張原Anti-Phospho RGS16 (Tyr168) Antibody人血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
哈茨木霉小鼠組Anti-Phospho RRN3 (Ser649) Antibody人血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
枯草芽孢桿菌枯草亞種人c-myc癌基因產(chǎn)物Anti-Phospho SH3BP2 (S427) Antibody人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)
熱帶假絲酵母人Smad1Anti-Phospho SLC12A5 (KCC2) (Ser940) Antibody人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)
大腸埃希氏菌大鼠熱休克蛋白60Anti-Phospho SHB (Tyr246) Antibody人Podocin
枯草芽孢桿菌小鼠脂蛋白相關磷脂A2Anti-Phospho SLC6A3 (DAT) (Thr53) Antibody人Podocin
肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種小鼠熱休克蛋白90Anti-Phospho SLC6A4 (Thr276) Antibody人蛋白(nephrin)
肉糜 馬源性成分(定性)人Smad7Anti-Phospho SNCA (Ser129) Antibody人蛋白(nephrin)
中國漢納酵母乳變種大鼠二Anti-Phospho SNAP25 (Ser187) Antibody人α1微球蛋白(α1-MG)
枯草芽孢桿菌大鼠超氧化物歧化Anti-Phospho SMC1A (S966) Antibody人α1微球蛋白(α1-MG)
特異腐質(zhì)霉人腫瘤相關抗原Anti-Phospho SMAD3 (S423/S425) Antibody人尿微量白蛋白(ALB)
大腸埃希氏菌小鼠熱休克蛋白70Anti-Phospho SQSTM1 (Ser28) Antibody人尿微量白蛋白(ALB)
曲霉小鼠脂聯(lián)Anti-Phospho STXBP1 (Ser241) Antibody人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)
Thielavia 大鼠熱休克蛋白糖蛋白96Anti-Phospho TAOK2 (Ser181) Antibody人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)
前列腺癌抑癌蛋白3抗體山茶刺盤孢人惡性霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞
抑癌基因5抗體刺盤孢屬人食管腺癌細胞
腦腫瘤抑癌蛋白1抗體殼囊孢屬小鼠正常骨髓細胞
腫瘤蛋白p53誘導蛋白13腫瘤抑制基因桑樹枝枯病人盲腸腺癌細胞(未分化)
MEK1抑制劑(GDC-0623)有孢漢遜酵母屬 5-氟乳清酸
楊尾孢 油酸
土曲霉 亞油酸
長孢糖絲 7-β-羥基膽固
短密青霉 27-羥基膽固
漢遜德巴酵母 二甲基姜黃
少根根霉原變種 柚皮查爾酮
頂孢頭孢霉 四甲基姜黃
根瘤 去氫延胡索甲硝酸鹽
南擬酵母 亞油酸
暗孢節(jié)菱孢 肌
腸沙門氏腸亞種雞血清型 二氫兩面針堿
竹蓀屬 四氫表小檗堿
粘質(zhì)沙雷氏 環(huán)氧前胡
不動桿 8-羥基佛手苷內(nèi)酯