B-Raf抑制劑（GDC-0879）

B-Raf抑制劑（GDC-0879）公司*的產(chǎn)品：HAI-1/FITC 熒光標(biāo)記肝生長(zhǎng)因子激活物抑制因子抗體IgG原三酯 97.0%
HBA1/FITC 熒光標(biāo)記人類血紅蛋白α1抗體IgG二苯 98%
DcR1/TRAIL-R3/TRID/LIT 熒光標(biāo)記DcR1抗體IgG二苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)
HBME-1 /FITC 熒光標(biāo)記間質(zhì)HBME1蛋白抗體IgG二苯

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：B-Raf抑制劑（GDC-0879）

英文名稱：GDC-0879

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

泗川類芽孢桿菌人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1Anti-Phospho STXBP2 (Ser513) Antibody人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原(RANA)

壁芽孢桿菌人腫瘤血管生長(zhǎng)因子Anti-Phospho TNNI3 (cardiac) (Ser23/24) Antibody人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原(RANA)

蠟蚧菌小鼠熱休克蛋白40Anti-Phospho TERF1 (Ser219) Antibody人TH糖蛋白(THP)

蠟樣芽孢桿菌大鼠血清總補(bǔ)體Anti-Phospho TNS2 (Y483) Antibody人TH糖蛋白(THP)

新月彎孢霉*大鼠可溶性CD86Anti-Phospho TNS2 (Tyr483) Antibody人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)

豬丹絲菌人角蛋白20Anti-Phospho TK1 (Ser13) Antibody人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)

 藍(lán)色犁頭霉小鼠β淀粉樣蛋白Anti-Phospho TOB1 (S164) Antibody人尿蛋白(UP)

Nocardioides salarius 人角蛋白19Anti-Phospho TNNI3 (Ser43) Antibody人尿蛋白(UP)

纖維單胞菌屬大鼠低氧誘導(dǎo)因子1αAnti-Phospho TP53 (Ser392) Antibody人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白體9(LMP7/PSMB9)

澳大亞莢孢腔菌小鼠白介8Anti-Phospho TPH1 (Ser260) Antibody人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白體9(LMP7/PSMB9)

樟疫霉小鼠周期D3Anti-Phospho TPH1 (Ser58) Antibody人α2巨球蛋白(α2-MG)

聚生殼菌大鼠胰淀Anti-Phospho XIRP1 (Ser295) Antibody人α2巨球蛋白(α2-MG)

凍土毛霉人角蛋白18Anti-Phospho-ASAP1 Y782 Antibody人腎損傷分子1(Kim-1)

香蕉人嗜鉻蛋白AAnti-Phospho ZNF598 (Tyr306) Antibody人腎損傷分子1(Kim-1)

釀酒酵母大鼠白三烯C4Anti-Phospho-CaM Kinase II (Thr286) Antibody人水通道蛋白5(AQP-5)

干草寒冷桿菌小鼠周期D2Anti-Phospho-Aurora B pT232 Antibody人水通道蛋白5(AQP-5)

MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體茶褐斑盤多毛孢小鼠纖維肉瘤細(xì)胞

腦源性tau蛋白激抗體茶盤多毛孢KM小鼠子宮頸癌瘤株

基移換樣蛋白1抗體茶莖點(diǎn)霉小鼠單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞

膜型絲蛋白2抗體桑生殼針孢原代人皮膚黑色細(xì)胞
B-Raf抑制劑（GDC-0879）銅綠假單胞 蛇床

黑木耳 山柑子堿

云芝栓孔 櫻草

平凡假單胞 蓽茇酰

大腸埃希氏桿 3β-乙酰基齊墩果酸

大腸埃希 礦物油

Zimmermannella 3-表齊墩果酸

熱帶假絲酵母 甲基小檗堿

櫟生青霉 氧化小檗堿

滑菇 二氫血根堿

芽孢桿屬 2''-O-p-香豆?；登G

柔薄迷孔 2''-O-p-反式香豆酰基葒草苷

擬盤多毛孢屬 假人參皂苷RT1

無害李斯特氏 α-甘油磷酸鎂鹽

丁香假單胞 Raddeanoside 20 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)