MDM2/p53抑制劑（Nutlin 3b）

MDM2/p53抑制劑（Nutlin 3b）公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Phospho-NEDD4L (Ser342) /FITC 熒光素標記磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-WBSCR14/ChREBP /FITC 熒光素標記糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格

商品介紹：

以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。

對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。

3) 收集細胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。

4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小孢毛鬼傘Candida rugosa

小孢矛束霉Candida rugosa

乳乳球菌乳脂亞種Yarrowia lipolytica

韓國海桿狀菌Yarrowia lipolytica

Leifsonia shinshuensis Suzuki et al.Yarrowia lipolytica

日本根霉Candida rugosa

大腸桿菌Sporidiobolus salmonicolor

埃切許旺酵母Candida tropicalis

擬康寧木霉Candida maltosa

微小鏈霉菌Wickerhamia fluorescens

藍色犁頭霉Rhodosporidium toruloides

釀酒酵母Lipomyces starkeyi

枯草芽孢桿菌Rhodotorula sinensis

花臉香蘑Saccharomyces cerevisiae

綠垂曲霉Pichia jadinii

披發(fā)糖多孢菌Candida rugosa

小鼠核苷磷化(PNP)免疫試劑盒β淀粉樣肽（1-28）抗體人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)巴他賽

小鼠皮質(zhì)/腎上腺(CORT)免疫試劑盒有絲分裂激B抗體人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)比多巴

小鼠皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒軟骨蛋白聚糖抗體人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)枯

小鼠牛小腸堿性磷(CIAP)免疫試劑盒去整合樣金屬蛋白10抗體人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)維丁
MDM2/p53抑制劑（Nutlin 3b）ZNF828 英文名稱： 鋅指蛋白828抗體 0.2ml

DAO1 英文名稱： 阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml

凝血酶Ⅲ抗體 Anti-ATH Ⅲ 0.1ml

Anti-HAS/FITC 熒光素標記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-EphB1/Eph receptor B1(Tyr317) 磷酸化酪氨酸蛋白激酶受體B1抗體 規(guī)格 0.1ml

DPPA2 (developmental pluripotency associated gene2) 多能發(fā)育相關(guān)基因2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg