商品介紹:
MG149是Tip60抑制劑,IC50為74uM,對MOF的抑制性較相似,IC50為47uM,而對PCAF和p300則幾乎無活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1243583-85-8 純度:99.48% 分子量:340.46 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Tip60抑制劑(MG 149) | MG 149 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
泰國葡糖桿菌Escherichia coli大鼠肉堿脂酰轉(zhuǎn)移(CACT)
粘紅酵母Escherichia coli大鼠磷化乙酰羧化(pACCase)
靈芝Escherichia coli大鼠磷化乙酰羧化(pACCase)
綠產(chǎn)色鏈霉菌Escherichia coli大鼠金屬硫蛋白(MT)
假單胞菌Escherichia coli大鼠金屬硫蛋白(MT)
根霉菌Escherichia coli大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
溜曲霉Escherichia coli大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
桃色枝頂孢Escherichia coli大鼠乙酰酯(AChE)
大腸埃希菌Escherichia coli大鼠乙酰酯(AChE)
JonesiaEscherichia coli大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)
枯草芽胞桿菌Escherichia coli大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)
木霉Escherichia coli大鼠總膽汁(TBA)
類諾氏菌Escherichia coli大鼠總膽汁(TBA)
皺褶假絲酵母Escherichia coli大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)
黃團孢鏈霉菌Escherichia coli大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)
薄層菌Escherichia coli大鼠視黃結(jié)合蛋白(RBP)
磷化絲抗體懷槐多年臥孔菌雙位點HC-kit受體細胞株
小鼠增殖細胞核抗原單克抗體寬被多年臥孔菌社鼠皮膚成纖維樣細胞
蛋白磷2Cα抗體喜皮多年臥孔菌社鼠肺成纖維樣細胞
蛋白激C抗體軟帕氏孔菌花鼠肌肉成纖維樣細胞
Tip60抑制劑(MG 149)枯草芽孢桿 甘草酸二鹽
米曲霉 L-胱
淡紫擬青霉 L-瓜
紫穗槐根瘤 L-谷氨酰
枯草芽孢桿 L-谷
枯草芽孢桿 甘
坂口莊劍云氏酵母 L-脯
大腸埃希氏 蒽醌
乳桿屬 對乙酰氨基
鵝膏屬 對傘花烴
枯草芽孢桿 杜鵑
薄層屬 東莨菪內(nèi)酯
中山小短桿 東莨菪苷
短密青霉 丁香酸
豬丹絲 膽固