商品介紹:
EPZ020411鹽酸鹽是一種有效的選擇性PRMT6抑制劑,IC50為10nM,比作用于PRMT1和PRMT8選擇性高10倍多。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:98.03% 分子量:479.06 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
釀酒酵母造血干抗原CD133Anti-ARHGEF3 Antibody白介1θ(IL1θ)
鏈霉菌造血干抗原(多肽抗原)Anti-ARHGEF5 Antibody白介1η(IL1η)
溫特曲霉原變種H5亞型全病Anti-ARHGEF9 Antibody白介1ζ(IL1ζ)
鍺栓孔菌雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合?。〢nti-ARHGEF7 Antibody白介1ε(IL1ε)
香菇基質(zhì)衍生因子1Anti-ARID1B Antibody白介1δ(FIL1δ)
日本曲霉腺苷環(huán)化1多肽抗原Anti-ARID5B Antibody白介1β(IL1β)
乳桿菌屬c-erbB-2蛋白(抗原)Anti-ARID1B Antibody白介1α(IL1α)
檸條根瘤菌造血干特異性蛋白Anti-ARMC6 Antibody白介19(IL19)
紅色鏈霉菌蕈堿型乙酰受體(抗原)Anti-ARMCX1 Antibody白介18受體輔助蛋白(IL18RAP)
蘋果黑腐皮殼C-肽(C肽)Anti-ARL2BP Antibody白介18受體1(IL18R1)
梅奇酵母屬鈣結(jié)合蛋白(抗原)Anti-ARMCX2 Antibody白介18結(jié)合蛋白(IL18BP)
豬細(xì)小病腺苷受體A3抗原Anti-ARMCX3 Antibody白介18(IL18)
釀酒酵母巨噬來源的趨化因子αV多肽Anti-ARNT2 Antibody白介17受體A(IL17RA)
枯草芽孢桿菌磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗原Anti-ARPP21 Antibody白介17F(IL17F)
膠凍樣類芽孢桿菌環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原)Anti-ARPP21 Antibody白介17D(IL17D)
粉狀畢赤酵母磷化環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(多肽)Anti-ARRDC2 Antibody白介17C(IL17C)
帕金森病相關(guān)蛋白ATP13A2抗體Sphingomonastrueperi人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞株
6磷果糖激1抗體彎曲乳桿菌人宮頸癌細(xì)胞
神經(jīng)元PAS結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體小孢囊桿菌大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
蛋白酪磷受體PCPTP1抗體珊瑚狀珊瑚球菌人肺癌細(xì)胞
PRMT6抑制劑(EPZ020411 hydrochloride)莖點(diǎn)殼屬 九里香
土生假絲酵母 三萜酸 A
層出鐮刀 Methyl pseudolarate A
金龜子綠僵 Methyl dodonate A acetate
谷氨酸棒桿 Methyl 6-hydroxyangolensate
pAAV-RC-9 Methyl 3-(2,4-dihydroxyphenyl)pr
云南紅球 Methyl 2-(5-acetyl-2,3- dihydrob
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 Meliasenin B
松口蘑 Magnolignan C
珞珈山科恩氏 大果桉 H
膠韌革(榆耳,榆蘑) 大果桉 N
鐮刀屬 大果桉 E
枯草芽孢桿 咖啡酸羽扇豆
總狀毛霉 Lup-20(29)-ene-3α,23-diol
金黃桿屬 Longistylumphylline A