以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CB-7921220是腺苷酸環(huán)化酶(adenylate cyclase)的抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):115453-99-1 純度:98.0% 分子量:240.26 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
Oleanolic acid-3-O-β-D-gluc...英文名稱(chēng): Hematin磷化4E結(jié)合蛋白1抗體包裝1ml
Peritassine A英文名稱(chēng): PEG 800磷化4E結(jié)合蛋白1,2,3抗體包裝25ml
Pinocembrin 7-O-(3''-galloy...英文名稱(chēng): QuinestrolEpsin2B蛋白抗體包裝5ml
Presapogenin CP4英文名稱(chēng): Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Venom表皮生長(zhǎng)因子抗體包裝1g
Prosapogenin CP6英文名稱(chēng): Propidium iodide表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白8抗體包裝5g
Raddeanoside 20英文名稱(chēng): Sodium dodecylbenzenesulfonateE3泛連接抗體包裝1g
Sapindoside A英文名稱(chēng): Sodium silicate hydrate小鼠抗表皮生長(zhǎng)因子抗體包裝200mg
Smyrindioloside英文名稱(chēng): Bluo-Gal抗表皮生長(zhǎng)因子抗體包裝1g
Thonningianin A英文名稱(chēng): Disodium hydrogen phosphate dihydrate內(nèi)皮受體蛋白酪激A2+A3+A4抗體包裝250mg
Tokinolide B英文名稱(chēng): Neutral Protease from Bacillus polymyxa磷化內(nèi)皮受體蛋白酪激A2+A3+A4抗體包裝5g
Triptonine B英文名稱(chēng): PEG 200磷化內(nèi)皮受體蛋白酪激A3+A4+A5抗體包裝25g
α-倒捻子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sodium carbonate, decahydrate轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體包裝5g
α-蒎烯英文名稱(chēng): Aluminum oxide, activeE選擇抗體包裝1g
α-乳香英文名稱(chēng): D-Tartaric acid hydrate大腸桿菌耐熱性腸抗體包裝5g
α-石竹烯英文名稱(chēng): Indole泛激活E1抗體包裝1g
都柏林沙門(mén)氏菌Salmonella│dublin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品四氫生物蝶呤試劑盒人參皂苷CK;20(S)-Ginseno
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%四連接試劑盒人參皂苷F2;Ginsenoside F
明膠樣鏈霉菌Streptomyces│gelaticus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品死亡相關(guān)蛋白1試劑盒人參皂苷F1;Ginsenoside F
adenylate cyclase抑制劑(CB-7921220)鋅指脂蛋白-1b抗體毛旋花苷 K CYMARIN(RG)Human, Mouse
zeta相關(guān)蛋白70抗體毛旋花苷 K CYMARIN(P)(PLEASE CALL)Human, Rat
白血病相關(guān)新因抗體毛旋花苷 K CYMARIN(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse
鋅指蛋白307抗體毛旋花苷 K CYMARIN(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
斑聯(lián)蛋白抗體環(huán)巴 CYCLOPAMINE(RG)Human, Mouse
鋅指蛋白474抗體大豆 DAIDZEIN(RG)Human, Mouse, Rat
鋅指蛋白BED4抗體大豆 DAIDZEIN(RG)Human, Mouse
著絲粒蛋白抗體大豆 DAIDZEIN(AS)Human, Mouse
鋅指蛋白231抗體大豆 DAIDZEIN(AS)Human, Mouse