以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CGP57380是一種細(xì)胞滲透的吡唑-嘧啶類(lèi)化合物,為具有選擇性的Mnk1抑制劑,IC50值為2.2μM,但是對(duì)p38,JNK1,ERK1/2,PKC或Src-like激酶等沒(méi)有抑制作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):522629-08-9 純度:98.48% 分子量:244.23 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
產(chǎn)氮假單胞菌小鼠絨毛膜促性腺激βAnti-PLK3 Antibody人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)
葉點(diǎn)霉屬人腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子Anti-PLXDC1 Antibody人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)
楊奇青霉人色上皮衍生因子Anti-PMCH Antibody人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型小鼠性激結(jié)合球蛋白Anti-PLXNC1 Antibody人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)
Chryseomicrobium imtechense人白介23Anti-PMS2CL Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)
樹(shù)舌2-3小鼠脫氫表雄S7Anti-PNKP Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)
金針菇(毛柄金錢(qián)菌、冬菇)人克蛋白Anti-PMEPA1 Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
pSH-EFIRES-B-AtAFB2-mCherry大鼠心肌營(yíng)養(yǎng)1Anti-PNCK Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
成晶節(jié)桿菌大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgAAnti-PMEPA1 Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)
釀酒酵母小鼠脫氫表雄Anti-PNN Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)
蛛網(wǎng)菌人低氧誘導(dǎo)因子1αAnti-PNPLA6 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)
火木層孔菌人黑色抗體Anti-PNPLA8 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)
豬丹絲菌小鼠高遷移率族蛋白B1Anti-PNPLA8 Antibody人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)
泡盛曲霉大鼠脂蛋白αAnti-PODXL2 Antibody人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)
金黃弗特氏菌人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Anti-POFUT1 Antibody人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)
圍小叢殼小鼠內(nèi)皮脂肪Anti-POFUT2 Antibody人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)
跨膜蛋白4超家族成員3抗體番茄葉點(diǎn)菌人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞
宮頸癌原癌基因8抗體貝氏葡萄座腔菌梨專(zhuān)化型人喉表皮樣癌細(xì)胞
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8抗體新月彎孢霉小鼠結(jié)節(jié)性硬化癥細(xì)胞
跨膜蛋白161A抗體柿苗擬莖點(diǎn)霉人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞
Mnk1抑制劑(CGP 57380)賴芽胞桿屬 西伯亞遠(yuǎn)志口山酮B
火木層孔 乙酰升麻-3-O-α-L-阿伯糖苷
爪哇擬青霉 Cimiracemoside D
樺褶孔 瓜子金皂苷V
教酒色鏈霉 五味子酯戊
間型彎孢 西伯亞遠(yuǎn)志糖A5
沃氏富鹽 牡丹皮苷C
寡養(yǎng)單胞 苯甲酰氧化芍藥苷
核黃氧化德沃斯氏 丹皮新苷
Sinomonas 6'''-阿魏酰斯皮諾
深紅酵母 4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基呫噸酮
牛邊緣無(wú)漿體(皋蘭株) 7-O-甲基杧果苷
異常畢赤酵母 北芹
絳紅小單孢 丹皮原苷
鏈霉 管花苷A