PI3K/mTOR抑制劑(PF-04979064)

PI3K/mTOR抑制劑(PF-04979064)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-TSHR/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Caspase-12(hunman) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一抗體 Anti-VSIG4 Antibod

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

糞腸球菌Bacillus thuringiensis雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)

費(fèi)氏中華根瘤菌（未復(fù)核）Bacillus subtilis subsp. subtilis雞白介1β(IL-1β)

大禿馬勃Bacillus thuringiensis雞白介1β(IL-1β)

釀酒酵母Bacillus cereus雞主要組織相容性復(fù)合體(MHC/B)

假單孢菌Bacillus cereus雞主要組織相容性復(fù)合體(MHC/B)

粉虱座殼孢Bacillus subtilis subsp. subtilis雞熱休克蛋白70(HSP-70)

灰葡萄孢Bacillus cereus雞熱休克蛋白70(HSP-70)

大腸埃希氏菌Bacillus cereus雞白痢抗體檢測(cè)(PD)

根癌土壤桿菌Bacillus cereus雞白痢抗體檢測(cè)(PD)

MarisediminicolaBacillus cereus雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)

黑木耳Bacillus cereus雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)

詹氏桿菌Bacillus cereus雞α干擾(IFN-α)

枯草芽孢桿菌Bacillus cereus雞α干擾(IFN-α)

北方棲低境菌Bacillus cereus雞白介18(IL-18)

假諾氏菌Bacillus cereus雞白介18(IL-18)

豬丹絲菌Bacillus cereus雞白介1(IL-1)

生長(zhǎng)抑受體2抗體石南棒桿菌禽腺病毒（7型）

生長(zhǎng)抑受體5抗體巴西固氮螺菌禽腺病毒（12型）

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體產(chǎn)氮芽胞桿菌傳染性法氏囊病病毒

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5抗體嗜熱嗜氣解硫胺桿菌草魚(yú)出血病病毒
PI3K/mTOR抑制劑(PF-04979064)Salmonella typhimurium 英文名稱(chēng)： 鼠傷寒沙門(mén)氏菌 0.2ml

phospho-EGFR (Tyr1172) 英文名稱(chēng)： 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 0.1ml

骨橋蛋白抗體 Anti-OPN 0.1ml

Anti-Snail/FITC 熒光素標(biāo)記抗Snail蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-NMDAR2B (Ser1480) 磷酸化谷氨酸受體2B抗體 規(guī)格 0.1ml

C-Peptide( C-PEP ) C-肽(C肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg