以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Fatostatin是一個SREBP的抑制劑,能夠結(jié)合SCAP,阻止它的ER-to-Golgi運(yùn)輸,在哺乳動物中IC50分別是2.5到10uM之間。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:125256-00-0 別名:125B11 純度:99.81% 分子量:294.41 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
多主葡萄殼菌乙酰羧化Anti-GNG5 Antibody人膽囊收縮/縮膽囊八肽(CCK-8)
聚生殼菌堿性磷Anti-GNG5 Antibody人膽囊收縮/縮膽囊八肽(CCK-8)
疏毛盤多毛孢α1性糖蛋白1/類粘蛋白1Anti-GNPDA1 Antibody人原激活肽(TAP)ELISA
棕色固氮菌 水通道蛋白-5抗原Anti-GNL3L Antibody人原激活肽(TAP)ELISA
光帽鱗傘糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽Anti-GNRH1 Antibody人α1性糖蛋白(α1-AGP)
皮膚皮狀新絲孢酵母β淀粉樣肽25-35/Aβ25-35/Amyloid β (25-35) (多肽)Anti-GORASP2 Antibody人α1性糖蛋白(α1-AGP)
鞘桿菌屬β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽)Anti-GOLT1A Antibody人內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
擬枝孢鐮孢甲胎蛋白多肽Anti-GORASP2 Antibody人內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
尖孢鐮刀菌人甲胎蛋白多肽Anti-GOSR1 Antibody人二(MDA)
Glaciimonasβ淀粉樣肽1-40(結(jié)構(gòu)改造)Anti-GP1BA Antibody人二(MDA)
異常漢遜酵母異常變種β淀粉樣肽29-42(野生型)Anti-GOSR2 Antibody人胰淀(Amylin)
聚生殼菌蛇巴曲Anti-GP1BA Antibody人胰淀(Amylin)
三亞布勒擔(dān)子酵母溴脫氧尿苷Anti-GP5 Antibody人血管活性腸肽(VIP)
桃色青霉β淀粉樣肽29-40(野生型)Anti-GPAT3 Antibody人血管活性腸肽(VIP)
玫瑰單胞菌三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2Anti-GPAT3 Antibody人膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)
棘孢木霉 β淀粉樣肽(1-16)多肽Anti-GPC3 Antibody人膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)
鈣結(jié)合樣蛋白/神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記物抗體球型芽孢桿菌外周血B細(xì)胞白血病細(xì)胞
絲/蘇蛋白激SRPK7抗體糞產(chǎn)堿菌人肝癌細(xì)胞順鉑耐藥株
磺基葡糖硫胺抗體微黃八疊球菌大鼠組織胰腺、胰島細(xì)胞瘤
免疫球蛋白μ鏈結(jié)合蛋白2抗體莢膜紅細(xì)菌人低分化肺腺癌細(xì)胞
SREBP抑制劑(Fatostatin A)柱形假絲酵母 海因
圓孢生孢八疊球 8-羥基喹哪啶
南微球 氮尿苷
米根霉 黃原膠
戊糖乳桿 瓜爾豆膠
金灰青霉 (S)-(+)-1,2-
大腸埃希氏桿 R-(-)-1,2-
根瘤 5-溴
黏膜乳桿 DL-α-硫辛酸
Bacillus aryabhattai 石膽酸
圍小叢殼 對稱二苯基偶氮羰酰肼
紫芝 2,2-二羥甲基丁酸
暗孢節(jié)菱孢 福氏不*佐劑
孟氏假單胞 福氏*佐劑
青霉(加詞待譯) 薄荷