以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Cecropin B能夠抑制CYP3A29的表達(dá)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):80451-05-4 純度:98.12% 分子量:3834.67 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISA Kit英文名稱(chēng):AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g
抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)ELISA Kit英文名稱(chēng):ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體包裝100g
抗酒石性磷5b(TRACP-5b)ELISA Kit英文名稱(chēng):TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g
抗酒石性磷5b(TRACP5b)ELISA Kit英文名稱(chēng):TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移α4Gn-T抗體包裝5g
抗酒石性磷(TRACP)ELISA Kit英文名稱(chēng):TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;贵w包裝10ml
抗抗體(AsAb)ELISA Kit英文名稱(chēng):AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;鶚拥鞍?抗體包裝1g
抗?fàn)钕偾虻鞍卓贵w(ATGA/TGAB)ELISA Kit英文名稱(chēng):ATGA/TGAB ELISA Kit基乙二半脫氫磷泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移抗體包裝25g
抗?fàn)钕龠^(guò)氧化物抗體(TPO-Ab)ELISA Kit英文名稱(chēng):TPO-Ab ELISA Kit賴(lài)戊二還原抗體包裝5g
抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA Kit英文名稱(chēng):EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域6抗體包裝25g
抗環(huán)胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)ELISA Kit英文名稱(chēng):Anti-CCP-antibody ELISA Kit精2抗體包裝5g
抗紅細(xì)胞抗體(RBC)ELISA Kit英文名稱(chēng):RBC ELISA Kit固還原家族1成員C3抗體包裝1g
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA Kit英文名稱(chēng):gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激受體包裝5g
抗核抗體(ANA)ELISA Kit英文名稱(chēng):ANA ELISA Kit褐黑相關(guān)蛋白ART抗體包裝1g
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA Kit英文名稱(chēng):ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質(zhì)線(xiàn)粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg
抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA Kit英文名稱(chēng):AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g
磷化粘附相關(guān)激抗體促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激的 IC5
CYP3A29表達(dá)抑制劑(Cecropin B)嗜中性粒胞漿因子1抗體知母皂苷E(標(biāo)準(zhǔn)品) Cloperastine hydrochloride
線(xiàn)粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體梔子(標(biāo)準(zhǔn)品) Mannitol;D-Mannitol
雄激受體復(fù)合物相關(guān)蛋白/核受體相互作用蛋白抗體蜘蛛香(標(biāo)準(zhǔn)品) Mannitol;D-Mannitol
9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框156抗體植(標(biāo)準(zhǔn)品) Elacridar;GF120918;GW0918
核因子活化T胞漿蛋白3抗體止瀉木子(標(biāo)準(zhǔn)品) Venlaine hydrochloride
干轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體枳殼(標(biāo)準(zhǔn)品) Venlaine hydrochloride
神經(jīng)凋亡抑制蛋白抗體枳實(shí)(橙)(標(biāo)準(zhǔn)品) Protoporphyrin IX
樣蛋白2抗體制何首烏(標(biāo)準(zhǔn)品) Ropivacaine mesylate
SNF1/AMP激相關(guān)激2抗體腫節(jié)風(fēng)(草珊瑚)(標(biāo)準(zhǔn)品) Ropivacaine mesylate