詳細(xì)介紹
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI]生長(zhǎng)特性注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出觀(guān)察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力,如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力,請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶(hù)自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通交流。
6. 該細(xì)胞只能用于科研,不得用于臨床應(yīng)用公司細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞株種類(lèi)齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人宮頸癌細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿(mǎn),光澤度好,*,專(zhuān)業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶(hù)!
細(xì)胞名稱(chēng) 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI]生長(zhǎng)特性
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來(lái)的一株白細(xì)胞介素-2依賴(lài)型NK細(xì)胞株。 NK-92MI是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92的IL-2非依賴(lài)的NK細(xì)胞株。 親本細(xì)胞通過(guò)微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2 cDNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。 可能由于載體整合到基因組DNA中,轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。 這株細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性;鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。 NK-92細(xì)胞有以下特征: CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45,
培養(yǎng)條件 α-MEM:Alpha Minimum Essential Medium (with Nucleosides) 馬血清, 12.5%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,12.5%
傳代方法 1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI]生長(zhǎng)特性復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿(mǎn)37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀(guān)察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
* HRP標(biāo)記羊抗人IgM 800付/箱
* RT HRP標(biāo)記羊抗人C3 2000只/箱
* RT HRP標(biāo)記羊抗人纖維蛋白 2000只/箱
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) RT HRP標(biāo)記羊抗小鼠IgG 3000付/箱
* RT HRP標(biāo)記羊抗兔IgG 250克
* HRP標(biāo)記羊抗馬IgG 250克
* HRP標(biāo)記羊抗猴IgG 250克
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) RT HRP標(biāo)記羊抗狗IgG 250克
* 辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG 250克
* 辣根酶標(biāo)記山羊抗人IgG 250克
* 辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG 250克
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) RT 辣根酶標(biāo)記馬抗山羊IgG 800條/箱
* 辣根酶標(biāo)記山羊抗大鼠IgG 800條/箱
* 堿磷酶標(biāo)記山羊抗兔IgG 100條