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技術文章

分析大腸桿菌的傳統檢測法

閱讀:1423          發(fā)布時間:2017-4-13


1.菌種培養(yǎng)多管發(fā)酵法(MTF,Multiple-tube fermentation)
多管發(fā)酵法是根據大腸菌群能發(fā)酵乳糖產酸產氣的特征,檢測水樣中大腸菌群的方法。多管發(fā)酵的大腸菌群陽性,如果在 44.5℃的培養(yǎng)基上進行 24h的培養(yǎng),能釋放出熒光產物而使培養(yǎng)基在紫外光源的照射下呈現熒光反應,此種方法即可檢測出樣本中是否含有大腸桿菌,具體步驟:取一定量水樣于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中進行初發(fā)酵實驗(推測實驗),再進行平板分離(證實實驗)復發(fā)酵實驗鑒定(完成實驗)。根據各稀釋度發(fā)酵的管數查zui可能數(mostprobable number,MPN)表,求得每 10mL 或每升水樣中的大腸菌群數 該法方法簡單,實驗的要求和成本低,但是該方法易受其他因素的干擾而影響結果的準確性。
2.濾膜法(MF,membrane filter)
濾膜法是目前zui為流行的檢測水中大腸桿菌群的方法。菌種培養(yǎng)濾膜法的具體步驟是首先將一定量的水體樣本注入 0.45μm的濾膜過濾,經過抽濾,水中的細菌則被留在濾膜上,將濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上培養(yǎng) 24h,溫度為恒溫 37℃,這使得菌群因發(fā)酵乳糖而使得濾膜,出現紫紅色,通過計算濾膜上的菌落進而計算出單位樣 本 中 的 大 腸 桿 菌 的 數 量。張 淑 蘭 等[1]用ISO9308-1 規(guī)定的濾膜法測定水中大腸桿菌回收率均值為 94.7% ,批內變異系數小于 0% ,檢出限為500mL 水樣可檢出 1 個 CFU。該方法費用較低、原理簡單、利于推廣,但檢測時間相對較長、步驟繁瑣、干擾因素多,不適于大量樣品的分析,無法滿足污染物品快速檢測需求。
3.平板計數法(plate count)
該方法是統計物品含菌數的有效方法,操作的順序是首先將樣本進行適當稀釋,使其中的微生物充分分散成單個細胞,取定量的稀釋液進行培養(yǎng)使其逐漸生長成肉眼可觀察的菌落,然后通過稀釋度和樣本數量來計算菌數。但是,由于待測樣品往往不宜*分散成單個細胞,所以,長成的一個單菌落也可能來自樣品中的 2~3或更多個細胞,菌種培養(yǎng)因此平板菌落計數的結果往往偏低。
 

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