KM71酵母表達(dá)菌產(chǎn)品簡介：
        KM71是畢赤酵母菌株，屬于真核細(xì)胞。一般的針對(duì)原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對(duì)酵母是無效的，因此為了防止大腸桿菌等原核生物對(duì)酵母培養(yǎng)菌株污染，往往會(huì)在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素，來抑制細(xì)菌菌的污染和生長。KM71畢赤酵母自身表型為MutS，所以KM71轉(zhuǎn)化株只能產(chǎn)生出His+MutS菌株。畢赤酵母適宜的生長溫度是28至30度，一般可以設(shè)置在30度培養(yǎng)，溫度超過32度對(duì)蛋白的表達(dá)是有害的，并可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。
        KM71畢赤酵母是是組氨酸缺陷型（His4基因型），如果表達(dá)載體上攜帶有組氨酸基因，可補(bǔ)償宿主菌的組氨酸缺陷，因此可以在不含組氨酸的培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)化子。這些受體菌自發(fā)突變?yōu)榻M氨酸野生型的概率一般低于10-8。
        KM71畢赤酵母可以在YPD培養(yǎng)基中生長，或者在補(bǔ)充有組氨酸的minimal media中生長，但是無法在單獨(dú)的minimal media培養(yǎng)基中生長。用30%的甘油與培養(yǎng)物混合保藏菌種，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的方法：電轉(zhuǎn)化。
 
KM71酵母表達(dá)菌操作說明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌時(shí)可以不用*融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以*融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。
2，為保證菌種純正，避免其它細(xì)菌污染，盡量先劃平板，然后再挑單克隆菌落進(jìn)行后續(xù)操作。 
冷凍管開封：
用浸過75%酒精的脫脂棉嚴(yán)格消毒冷凍管蓋。
 
菌株復(fù)溶：
無菌環(huán)境中旋開裝有復(fù)溶液的滴瓶蓋，吸取1ml 左右復(fù)溶液，加入到冷凍管中。輕輕振蕩，使凍干菌株溶解呈懸浮狀。
菌株復(fù)壯：
用無菌吸管吸取菌懸液，轉(zhuǎn)移到復(fù)溶液滴瓶中。做好標(biāo)識(shí)，在適宜溫度下培養(yǎng)。細(xì)菌在30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，真菌在23-28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-72h（必要時(shí)，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間）。
 
菌株傳代：
將得到的菌株的新鮮培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到適宜的固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基中（盡量增大接種量：如用無菌吸管吸取≥50μl 新鮮培養(yǎng)物至固體培養(yǎng)基，邊移動(dòng)邊緩慢釋放），適宜溫度下培養(yǎng)，用以菌株的保藏、傳代及制備工作菌株。
 
注意事項(xiàng)：
1、菌種活化前，將冷凍管保存在低溫、清潔、干燥的環(huán)境中，長時(shí)間室溫下放置會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
2、冷凍管開封、凍干粉復(fù)溶、菌株恢復(fù)培養(yǎng)等操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；
3、一些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，部分需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長；
4、苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)需采用含特定營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，敬請(qǐng)正確選擇，不清楚時(shí)來電詢問；
5、某些厭氧菌的培養(yǎng)，自開封到接種完成，均需以無氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)；培養(yǎng)過程中亦要保持厭氧狀態(tài)；
6、某些菌種，如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2 促進(jìn)生長；
7、如發(fā)現(xiàn)冷凍管蓋松動(dòng)、復(fù)溶液渾濁等異常情況，應(yīng)停止使用對(duì)應(yīng)產(chǎn)品。
8、部分菌種有致病性、擴(kuò)散性，請(qǐng)專業(yè)人員在專業(yè)環(huán)境下有保護(hù)性操作。
 
保藏條件：
-20℃保存（復(fù)溶液于2-8℃保存）
 
KM71酵母表達(dá)菌保藏時(shí)間：
2-10 年，應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接