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微生物菌種的保藏方法

閱讀:491          發(fā)布時間:2017-8-16

由于教學實驗各時期使用的真菌微生物菌種在數(shù)量及種類上不盡相同,所以與其相適應的培養(yǎng)方法與保管方式亦不相同。大體上分為定期傳代保存法、超低溫凍結(jié)保存法兩種。


1、 定期傳代保存法

(1)液體培養(yǎng)基保存法:單細胞真菌接種于RPMI 1640培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24 h,取出后置4℃冰箱保存。該方法用于學期初低溫凍結(jié)菌種的復蘇、增菌培養(yǎng)。

(2)瓊脂平板培養(yǎng)基保存法:學期開始,多細胞凍結(jié)菌種解凍后,劃線接種于察氏平板培養(yǎng)基上面,28℃培養(yǎng)7~8 d,再將培養(yǎng)菌絡移種于改良馬丁平板培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)7 d,待培養(yǎng)菌絡生長良好,置4℃冰箱保存。為多細胞真菌的復蘇與鑒定試驗。

(3)瓊脂斜面培養(yǎng)基保存法:單細胞真菌由液體培養(yǎng)基中多細胞真菌從馬丁培養(yǎng)基表面,分別挑取菌種菌絡,蜿蜒化線接種于各自相對應的瓊脂斜面培養(yǎng)基中,經(jīng)37℃或28℃培養(yǎng)生長良好后,置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。該方法用于學期中,真菌菌種即將使用,實驗課前的菌種純化和制備階段。

(4)液體石蠟覆蓋保存法:將無菌液體石蠟油覆蓋于菌絡生長良好的瓊脂斜面真菌培養(yǎng)物表面,厚度約1 cm左右,置4℃冰箱保存。該法用于學期末對真菌菌種較長時期的保存方法。

2、 液氮超低溫凍結(jié)保存法

將單細胞或多細胞真菌培養(yǎng)物,以無菌生理鹽水洗下并計數(shù),加入等量脫脂牛奶保護劑,分裝進安瓿后封口。選擇菌種不同的適宜冷卻速度,使瓿內(nèi)菌懸液急速或慢速凍結(jié)成冰。置液氮超低溫下保存。

各菌種保存方法結(jié)果分析:

(1)液體培養(yǎng)基保存法,可保存單細胞真菌15 d左右。

(2)瓊脂平板培養(yǎng)基保存法,保存多細胞真菌15 d。

(3)瓊脂斜面培養(yǎng)基保存法,保存單細胞、多細胞真菌1個月。

(4)液體石蠟覆蓋保存法,可保存真菌菌種6個月。

(5)液氮超低溫凍結(jié)保存法 可保存凍結(jié)菌種1年。

一般認為,傳代移種保存法保存的微生物菌種,易失去病原性,而超低溫保存法能夠完整的保存菌種的致病性。為此,我們針對實驗的初、中、末3個時期,對菌種的保存選擇不同的保存方法,優(yōu)化了菌種的遺傳特性不變性。
 anti-HAV     人抗甲型肝炎病毒IgG抗體     規(guī)格:    48T/96T
 EMA IgA     人抗肌內(nèi)膜抗體IgA     規(guī)格:    48T/96T
 TTN     人抗肌聯(lián)蛋白抗體     規(guī)格:    48T/96T
 AAA     人抗肌動蛋白抗體     規(guī)格:    48T/96T
 CCP     人抗環(huán)胍氨酸肽抗體     規(guī)格:    48T/96T
 RSV     人抗呼吸道合胞病毒抗體     規(guī)格:    48T/96T
微生物菌種

 

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