小鼠乳腺瘤病毒進口PCR試劑

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。本試劑盒不但準確、快速、靈敏，還具有以下

特點：
1.  即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單。
2.  預期的 PCR 產(chǎn)物長度為 494 bp。
3.  本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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Q-PCR技術：       
      實時熒光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR，是指在PCR反應體系中加入熒光標記物，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過擴增曲線對未知模板進行定量分析的方法。熒光定量PCR不僅實現(xiàn)真正實現(xiàn)了定量，而且具有靈敏度和特異性、高能實現(xiàn)多重反應、自動化程度高、無污染、實時和準確等特點。   
熒光定量PCR所使用的熒光基團可分為兩種：熒光探針和熒光染料。
 1.使用SYBR熒光染料法來進行熒光定量PCR時，我們首先在PCR反應體系中加入過量SYBR熒光染料。SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后發(fā)射一定量的熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
2.Taqman探針則是利用探針與模板的特異性結(jié)合的特點，以及探針內(nèi)熒光報告基團和淬滅基團的分子特性來實現(xiàn)對PCR進行定量檢測。這種方法可以實現(xiàn)高靈敏度，嚴格針對特定堿基序列的定量實驗。