擬枝孢鐮刀菌PCR試劑免費(fèi)代測

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏，還具有以下

特點(diǎn)：
1.  即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單。
2.  預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 494 bp。
3.  本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

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Q-PCR技術(shù)：       
      實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過擴(kuò)增曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。熒光定量PCR不僅實(shí)現(xiàn)真正實(shí)現(xiàn)了定量，而且具有靈敏度和特異性、高能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)、自動(dòng)化程度高、無污染、實(shí)時(shí)和準(zhǔn)確等特點(diǎn)。   
熒光定量PCR所使用的熒光基團(tuán)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。
 1.使用SYBR熒光染料法來進(jìn)行熒光定量PCR時(shí)，我們首先在PCR反應(yīng)體系中加入過量SYBR熒光染料。SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后發(fā)射一定量的熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
2.Taqman探針則是利用探針與模板的特異性結(jié)合的特點(diǎn)，以及探針內(nèi)熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的分子特性來實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR進(jìn)行定量檢測。這種方法可以實(shí)現(xiàn)高靈敏度，嚴(yán)格針對(duì)特定堿基序列的定量實(shí)驗(yàn)。