一、準(zhǔn)備工作

1. 選擇合適的生物指示劑

• 根據(jù)滅菌物品的性質(zhì)和滅菌工藝要求，選擇含有合適微生物的生物指示劑。通常環(huán)氧乙烷滅菌生物指示劑含有枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC 9372）芽孢，這種芽孢對(duì)環(huán)氧乙烷的耐受性較強(qiáng)，能有效反映滅菌效果。

• 同時(shí)，要考慮生物指示劑的包裝形式，如自含式生物指示劑（內(nèi)部包含菌片、培養(yǎng)液和培養(yǎng)容器）和非自含式生物指示劑（菌片和培養(yǎng)液分開(kāi)），根據(jù)實(shí)際使用場(chǎng)景和便捷性進(jìn)行選擇。

2. 檢查生物指示劑完整性

• 仔細(xì)查看生物指示劑的包裝，確保包裝沒(méi)有破損、裂縫或其他損壞跡象。如果包裝損壞，可能會(huì)導(dǎo)致芽孢失活或者受到污染，從而影響監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

二、放置生物指示劑

1. 確定放置位置

• 對(duì)于滅菌物品，將生物指示劑放置在最難滅菌的部位。例如，在滅菌復(fù)雜的醫(yī)療器械套裝時(shí)，要將生物指示劑放置在器械的內(nèi)部通道、關(guān)節(jié)處或多層包裝的中心位置。如果是多孔物品，要確保生物指示劑位于物品的內(nèi)部孔隙中，以模擬環(huán)氧乙烷氣體最難穿透的情況。

• 對(duì)于大型滅菌設(shè)備，如環(huán)氧乙烷滅菌柜，若滅菌物品較多且分布在不同層次和位置，應(yīng)在不同的位置放置生物指示劑，包括上層、中層、下層，以及靠近柜門(mén)和后壁等位置，以全面監(jiān)測(cè)滅菌效果。一般來(lái)說(shuō)，每一個(gè)滅菌批次至少要放置一個(gè)生物指示劑。

三、進(jìn)行滅菌操作

1. 按照正常滅菌程序操作

• 將放置好生物指示劑的滅菌物品放入滅菌設(shè)備，然后按照既定的環(huán)氧乙烷滅菌參數(shù)進(jìn)行滅菌。這些參數(shù)通常包括環(huán)氧乙烷濃度（一般為 450 - 1200mg/L）、溫度（37 - 63℃）、相對(duì)濕度（40% - 80%）和時(shí)間（1 - 6 小時(shí)不等，具體取決于滅菌條件和物品性質(zhì)）。

四、培養(yǎng)生物指示劑

1. 滅菌后取出

• 滅菌過(guò)程結(jié)束后，等待滅菌設(shè)備內(nèi)的環(huán)氧乙烷氣體充分排出，壓力降至零，然后打開(kāi)滅菌設(shè)備，小心取出生物指示劑。在取出過(guò)程中，要避免生物指示劑受到二次污染。

2. 進(jìn)行培養(yǎng)

• 自含式生物指示劑：如果是自含式生物指示劑，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，通常是通過(guò)擠壓或折斷某個(gè)部位，使菌片與培養(yǎng)液接觸，然后將生物指示劑放入專用的培養(yǎng)設(shè)備中。培養(yǎng)溫度一般設(shè)定為 30 - 37℃，這是枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢能夠生長(zhǎng)的適宜溫度。培養(yǎng)時(shí)間通常為 24 - 72 小時(shí)，具體時(shí)間根據(jù)生物指示劑的說(shuō)明書(shū)確定。

• 非自含式生物指示劑：對(duì)于非自含式生物指示劑，將菌片放入合適的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液要含有芽孢生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等，并且要具備指示芽孢是否生長(zhǎng)的功能（如含有酸堿指示劑）。將裝有菌片和培養(yǎng)液的容器放入培養(yǎng)設(shè)備，培養(yǎng)條件同自含式生物指示劑。

五、結(jié)果判斷

1. 陽(yáng)性結(jié)果判斷

• 如果在培養(yǎng)規(guī)定時(shí)間后，生物指示劑中的培養(yǎng)液顏色發(fā)生變化（如由紫色變?yōu)辄S色），并且有微生物生長(zhǎng)的跡象（如培養(yǎng)液變渾濁），則判定為陽(yáng)性結(jié)果。這表明滅菌不徹di，滅菌過(guò)程失敗。

2. 陰性結(jié)果判斷

• 如果培養(yǎng)后，生物指示劑中的培養(yǎng)液顏色保持不變（如仍為紫色），且沒(méi)有微生物生長(zhǎng)的跡象（培養(yǎng)液清澈），則判定為陰性結(jié)果。這意味著滅菌有效，達(dá)到了預(yù)期的滅菌效果。

3. 記錄和報(bào)告結(jié)果

• 將生物指示劑的測(cè)試結(jié)果詳細(xì)記錄下來(lái)，包括滅菌批次、滅菌日期、培養(yǎng)日期、結(jié)果（陽(yáng)性或陰性）等信息。如果出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，需要及時(shí)報(bào)告相關(guān)部門(mén)，并對(duì)滅菌設(shè)備和滅菌過(guò)程進(jìn)行檢查和重新評(píng)估，以確定滅菌失敗的原因并采取糾正措施。