小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，其特征為口腔、舌黏膜糜爛、流淚、流鼻涕。本病的易感動(dòng)物為山羊，也可感染綿羊、白尾鹿等，但對(duì)牛無(wú)感染。世界衛(wèi)生組織將小反芻獸疫列為需要通報(bào)的動(dòng)物傳染病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng) 物傳染病，為國(guó)家免疫計(jì)劃書(shū)中強(qiáng)制免疫的疫病之一。

 

【原    理】

    本試劑盒系由預(yù)包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標(biāo)板、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)羊血清、血漿樣本小反芻獸疫病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值， 即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。

 

 【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl；樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液，再加入10μl血清樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，37℃避光反應(yīng)15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。