一、染色步驟

1、工作液配制：?Tris堿5g+氯化鈣0.499g+蒸餾水定容至250ml，室溫保存。‚取?染液中合

適的量，用鹽酸調(diào)PH至10.4。ƒ取?染液中合適的量，每10ml的量加15mg的ATP鈉鹽，充

分溶解，調(diào)PH至9.4。

2、工作液孵育：未經(jīng)固定的新鮮組織冰凍切片自然晾干，PH10.4的工作液孵育5min，傾去孵育液，PH9.4的工作液孵育30min。

3、CaCL2染色：傾去孵育液，CaCL2溶液處理3次，每次2min。

4、硝酸鈷染色：硝酸鈷作用5min，流水沖洗5min。

5、硫化銨染色：1%硫化銨溶液處理30s，流水沖洗5min。

6、脫水封片：切片依次入無水乙醇I 5min -無水乙醇II 5min-無水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，中性樹膠封片。

7、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

二、結(jié)果判讀：

Ⅰ型呈淺灰色或無色，Ⅱ型呈深灰或黑色，分型清楚。

三、注意事項(xiàng)：

1、切片一定要是新鮮組織的冰凍切片，不可以固定。

2、Tris堿、氯化鈣粉劑常溫保存，硫化銨常溫避光保存，ATP鈉鹽-20℃保存，其它染液4℃

保存，使用前先復(fù)常溫。      

3、工作液和1%硫化銨溶液要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能保存。   

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