磺胺類藥物通常被稱為“磺胺類藥物"——磺胺類的衍生物（對(duì)氨基苯磺胺）。由于其抗菌性強(qiáng)、成本低、毒性低，常被用作獸醫(yī)治療常見細(xì)菌性疾病的抗菌藥物。獸藥的無(wú)節(jié)制使用和不遵守停藥期可能導(dǎo)致治療后藥物殘留在動(dòng)物組織中。這些殘留物可以通過動(dòng)物的乳汁傳染給人類。通常的做法是對(duì)奶牛使用各種抗生素進(jìn)行不同的治療，但這最終會(huì)導(dǎo)致抗生素殘留物在牛奶中積累，當(dāng)人類食用時(shí)會(huì)引起過敏反應(yīng)和毒性作用。


      歐盟監(jiān)管機(jī)構(gòu)發(fā)布了一系列*文件，旨在更好地規(guī)范獸藥的控制以保護(hù)消費(fèi)者。理事會(huì)指令96/23/EC7概述了對(duì)食用動(dòng)物中獸藥殘留的控制。


      在印度，F(xiàn)SSAI（2018年7月20日公報(bào)）和EIC（用于水產(chǎn)養(yǎng)殖、雞蛋、蜂蜜、奶牛等的RMP）要求對(duì)抗生素進(jìn)行早期和頻繁的分析。EIC和FSSAI已經(jīng)為動(dòng)物食品基質(zhì)中常見的一系列特定抗生素殘留建立了最大殘留*(MRL)。檢測(cè)牛奶中的磺胺類藥物殘留對(duì)于維護(hù)消費(fèi)者安全和防止他們接觸獸藥至關(guān)重要。本文概述了一種快速靈敏的LC-MS/MS方法，用于定量分析牛奶中的磺胺類抗生素。

實(shí)驗(yàn)性的硬件和軟件

PerkinElmer LX-50 UHPLC 系統(tǒng)用于色譜分離，同時(shí)通過配備 ESI 和 APCI 電離源的 PerkinElmer QSight™ 220 三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。

儀器控制、數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)處理均使用 Simplicity 3Q™ 軟件在一個(gè)窗口中進(jìn)行。表 1 提供了 LC 參數(shù)，包括色譜柱和流動(dòng)相梯度程序。

表 1. UHPLC 參數(shù)。資料來(lái)源：珀金埃爾默食品安全和質(zhì)量

材料:試劑和化學(xué)品
所有 CRM、試劑和化學(xué)品均為 NIST 可溯源和 LC-MS/MS 級(jí)。該研究還使用了 1 型水。


方法
儲(chǔ)備溶液和校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品的制備
用 10 mg/L 所有分析物的 10 mL 標(biāo)準(zhǔn)混合物制備儲(chǔ)備溶液。這是通過從母液到 10 mL 容量瓶的適當(dāng)體積來(lái)實(shí)現(xiàn)的，然后為每種抗生素分析物使用適當(dāng)?shù)娜軇?/span>

標(biāo)準(zhǔn)溶液均保存在 -20 oC。通過用水:乙腈 (80:20, v/v) 連續(xù)稀釋儲(chǔ)備溶液的工作溶液 (5, 10, 25, 50, 100 和 200 ng/ml) 制備校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品。


樣品提取程序

將總共 2 g ± 0.1 g 的樣品稱重到 50 mL PTFE 離心管中。
在將其在渦流中搖動(dòng)30秒并放置30分鐘之前，添加總共4mL的水。
總共加入 10 mL 乙酸乙酯，然后將其在渦旋中搖動(dòng) 2-3 分鐘，以確保溶劑和分析物的適當(dāng)相互作用。
將樣品以 10000 rpm 離心 10 分鐘。
將總共 5 mL 上清液加入到蒸發(fā)管中，并在 40 oC 的氮?dú)庹舭l(fā)器下蒸發(fā)至干。
樣品用 1 mL 乙腈:水 (80:20, v/v) 復(fù)溶并渦旋。
然后通過 0.2 µm 濾紙過濾樣品。
結(jié)果與討論
線性研究通過六個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)涵蓋 5 µg/L 至 200 µg/L 的濃度水平。該方法對(duì)牛奶基質(zhì)中研究的所有抗生素均表現(xiàn)出出色的線性，R 2 >0.99。所有抗生素的定量限 (LOQ) 均達(dá)到 10 µg/L。

表 2.基質(zhì)效應(yīng)。資料來(lái)源：珀金埃爾默食品安全和質(zhì)量

表 3.分析物的 MRM 離子對(duì)和保留時(shí)間。資料來(lái)源：珀金埃爾默食品安全和質(zhì)量

基質(zhì)效應(yīng)
將基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)（萃取前加標(biāo)的峰面積）與溶劑中標(biāo)準(zhǔn)品的相應(yīng)峰面積進(jìn)行比較。這是在六次重復(fù)中完成的。

該程序允許使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的面積和溶劑標(biāo)準(zhǔn)的面積（表2）將基質(zhì)效應(yīng)（ME）量化為峰面積的平均抑制或增強(qiáng)百分比。負(fù)ME值表示矩陣誘導(dǎo)的信號(hào)抑制，而正值表示信號(hào)增強(qiáng)。

恢復(fù)研究
所有化合物的回收率通過在10、25和50µg/k水平上加標(biāo)6次重復(fù)的牛奶樣品來(lái)確定。

發(fā)現(xiàn)所有分析物的回收率都在80%和120%之間，而所有化合物的RSD百分比均低于20%-符合法規(guī)要求的可接受值。

表4、5和6代表三次回收率和回收率以及RSD。完成最終稀釋因子的計(jì)算后，重復(fù)分析六次數(shù)據(jù)。

表 4. 10 μg/kg 加標(biāo)時(shí)的回收率，實(shí)際加標(biāo)時(shí)稀釋 5 倍。資料來(lái)源：珀金埃爾默食品安全和質(zhì)量