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質(zhì)粒中提試劑盒操作步驟
質(zhì)粒中提試劑盒是一種用于從大腸桿菌等細(xì)菌中快速、高效提取中量質(zhì)粒DNA的試劑盒，適用于多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)、文庫(kù)篩選、體外翻譯等常規(guī)分子生物學(xué)操作。
質(zhì)粒中提試劑盒操作步驟(以常見(jiàn)試劑盒為例)
細(xì)菌收集：取5-30ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管中，使用常規(guī)臺(tái)式離心機(jī)離心，盡量吸除上清。
細(xì)胞裂解：向有菌體沉淀的離心管中加入重懸液(如Solution I)，懸浮細(xì)菌沉淀。然后加入裂解液(如Solution II)，溫和地上下翻轉(zhuǎn)使菌體充分裂解。此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠。
中和與沉淀：加入中和液(如Solution III)，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)充分混勻，此時(shí)將出現(xiàn)白色絮狀沉淀。離心后，將上清液轉(zhuǎn)移到吸附柱中。
DNA吸附與洗脫：將上清液加入吸附柱中，離心后棄廢液。然后加入漂洗液(如DNA Wash Buffer)進(jìn)行漂洗，以去除殘留的雜質(zhì)。最后，將吸附柱置于干凈的離心管中，加入洗脫緩沖液(如Elution Buffer)進(jìn)行洗脫，收集質(zhì)粒DNA溶液。