基因型

F–ompT hsdS(rB–mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3)endAHte[argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]

簡(jiǎn)要說(shuō)明

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株來(lái)源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，從而減少對(duì)重組蛋白的降解，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子(AGA,AUA,CCC,CUA)對(duì)應(yīng)的tRNA (argU, ileY, proL, leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)，同時(shí)具有四環(huán)素，lu霉素，lian霉素，壯guan霉素抗性。BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108 cfu/µg DNA。

操作說(shuō)明

1、取100μl冰上融化的BL21-CodonPlus(DE3)-RIL感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。