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2101程序降溫儀的細胞凍存操作步驟
2101程序降溫儀的細胞凍存操作步驟
2101程序降溫儀簡單來說由程序來控制溫度，慢慢的逐步減低保存溫度，以免減溫速度過快，冰晶刺破凍存樣品（如細胞、胚胎，降溫過快冰晶容易刺破其細胞壁），從而使得樣品失效。也稱為程控降溫儀、胚胎冷凍儀等等。主要應用在精子、細胞、胚胎等領域的儲存，以及骨髓、造血干細胞、皮膚、角膜、內(nèi)分泌腺體、以及血管和瓣膜等的冷凍保存。
2101程序降溫儀進行細胞冷凍保存：
1.材料
生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管、0.4%(w/v)trypanblue、血球計數(shù)盤與蓋玻片、2101程序降溫儀。
2.冷凍保存方法
(1)傳統(tǒng)方法：冷存管置于4℃10分鐘>-20℃30分鐘>-80℃16-18小時(或隔夜)>液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫：利用已設定程序的2101程序降溫儀以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃，再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。
3.步驟
(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
(4)取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5-10%)，使細胞濃度為1-5×106cells/ml，混合均勻，分裝于已標示*之冷凍保存管中，1-2ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。
2101程序降溫儀廣泛用于凍存細胞、胚胎等。采用微機控制技術，軟件，能較準確地控制液氮的施放量，從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。操作簡便、人機界面清楚。