P19 小鼠畸胎瘤細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

加拿大渥太華大學的Mc Burney 等在1982 年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體外培養(yǎng)的多能干細胞, P19 細胞團經RA 誘導可分化成神經元、膠質細胞和纖維母細胞; 而經二甲基亞砜(DM SO ) 誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經元分化的過程中，神經發(fā)育相關基因的表達模式基本模擬了正常小鼠神經發(fā)育過程, 因此, P19 目前被用作一個研究神經發(fā)育的體外模型。

P19 細胞作為研究神經分化機制的模型, 顯著區(qū)別于其他細胞系的四大特點是:

①它具有正常小鼠的二倍體核型, 細胞分裂快, 可在體外迅速大量擴增, 多次傳代也不喪失其分化能力。

②P19 細胞具有多種分化潛力, 不同誘導條件下可定向分化成不同類型的細胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。

③根據P19 細胞誘導分化分階段進行的特點, 能將神經分化的早期機制與參與突起延伸的機制分開研究。

④該細胞易于轉染, 且轉染后仍能正常分化, 適于進行細胞基因研究。通過轉染正?；蛲蛔兊哪康幕? 增強或抑制它們的表達水平可用于研究這些基因在神經分化中的作用。另外, 利用反義RNA 阻斷內源蛋白的表達, 可用來觀察這些蛋白在神經分化中的作用。

P19 小鼠畸胎瘤細胞/鏡像綺點（iCell）特性

1） 來源：胚胎；畸胎癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時拍照與我們聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備MEMα培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，2.5%；小牛血清，7.5%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和服務介紹：

        一、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

        二、細胞系服務：
               細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
               細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等

        三、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養(yǎng)技術實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術外包服務、客戶定制服務等

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