動物源性DNA檢測試劑盒是為專業(yè)的高通量實驗室設計的,但是現(xiàn)在這種試劑盒是適合中低等通量的實驗室使用,這個試劑盒專門為每天需要制備的樣品量達到100個的實驗室而設計。
該試劑盒在連接探針末段引入不同長度的標簽序列,獲得長度各異的目的探針連接產(chǎn)物,利用熒光標記的通用引物對連接產(chǎn)物進行PCR擴增,通過熒光毛細管電泳對擴增產(chǎn)物進行電泳分離檢測,后通過對電泳圖譜的分析獲取各個位點的峰高,進而對樣品目的區(qū)域的拷貝數(shù)進行分析。
建議使用試劑配套動物基因組DNA提取系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。剪下所需測試數(shù)的已含有反應液的PCR管,放置在室溫待解凍后,離心30秒后揭開封口膜,向每管反應液中分別加入5μL模板,順序為NG、待測樣品模板。蓋好配套的PCR管蓋后,渦旋混勻30秒,離心1分鐘,立即進行PCR擴增反應。
1、需要按試劑準備中描述的方法,配制好動物源性DNA檢測試劑盒各種組分的工作液。
2、所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質(zhì)控品和樣品,建議做復孔。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
5、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
6、除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
8、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL,用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘;
9、如此重復4次,若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20秒的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。