I-Blue 質(zhì)粒提取試劑盒（無內(nèi)毒素）

I-Blue 中量質(zhì)粒提取試劑盒（無內(nèi)毒素）使用預(yù)裝的陰離子交換樹脂柱從50-150 ml培養(yǎng)的細(xì)菌中純化質(zhì)粒DNA。試劑盒中包含I-Blue裂解緩沖液 Lysis Buffer（可選的顏色指示），以防止常見的操作錯(cuò)誤，從而確保有效的細(xì)胞裂解和SDS沉淀。在重新懸浮步驟中添加了I-Blue裂解緩沖液，然后添加了PM2緩沖液。加入PM2緩沖液后，在混合過程中，樣品將*變成藍(lán)色時(shí)，樣品將開始變成藍(lán)色。無色區(qū)域或棕色團(tuán)塊表明裂解不*，應(yīng)繼續(xù)混合直至樣品*變藍(lán)。在中和步驟中，添加PM3緩沖液，劇烈搖動(dòng)試管將開始使樣品變回中性色。一旦樣品*無色，中和就完成了?，F(xiàn)在可以添加PER緩沖液以去除內(nèi)毒素?，F(xiàn)在可以完成純化質(zhì)粒DNA的結(jié)合，洗滌和洗脫。

由于分離柱的高效率，整個(gè)過程無需超速離心機(jī)，HPLC或其他有毒試劑，即可在80分鐘內(nèi)完成。純化的質(zhì)粒DNA適用于轉(zhuǎn)染，測(cè)序反應(yīng)，酶連接，PCR，體外轉(zhuǎn)錄，顯微注射，限制性內(nèi)切酶切和基因槍。

通過從50 ml過夜培養(yǎng)的E.coli(DH5α)中分離質(zhì)粒DNA，逐批測(cè)試了無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒的質(zhì)量。大腸桿菌（DH5α）培養(yǎng)物，含有pBluescript（A600> 2U / ml）。經(jīng)過純化過程，產(chǎn)量超過250 µg，A260 / A280比在1.8-2.0之間。純化的質(zhì)粒（1 µg）用于EcoRI消化，并通過電泳進(jìn)行分析。