CELL-WISE品牌 CW003 Insect Cell Medium 昆蟲(chóng)培養(yǎng)基具體介紹

HSF95 Insect Cell Medium（CW003）

產(chǎn)品基本信息

• 產(chǎn)品名稱：HSF95 昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基

• 產(chǎn)品貨號(hào)：CW003

• 產(chǎn)品規(guī)格：1L

產(chǎn)品描述

CW003 培養(yǎng)基專為 sf9、High Five 等昆蟲(chóng)細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)及瞬時(shí)表達(dá)設(shè)計(jì)，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)體系，無(wú)需額外添加血清、水解物等成分，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)與重組蛋白生產(chǎn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無(wú)血清配方：排除血清批間差異與外源污染風(fēng)險(xiǎn)，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定性與生產(chǎn)工藝一致性。

2.   即用型全培養(yǎng)基：預(yù)配制完成，無(wú)需補(bǔ)加任何成分，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)，簡(jiǎn)化操作流程。

3.   高效培養(yǎng)性能：支持 sf9、High Five 細(xì)胞的懸浮馴化與高密度培養(yǎng)（細(xì)胞密度可達(dá) 10?級(jí)水平），適合大規(guī)模工藝放大。

4.   表達(dá)系統(tǒng)兼容：與桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)（BEVS）高度適配，顯著提升重組基因蛋白的生產(chǎn)效率。

基礎(chǔ)參數(shù)

產(chǎn)品使用方法

一、細(xì)胞馴化與傳代

1. 培養(yǎng)條件

• 溫度：27±0.5℃

• 搖床轉(zhuǎn)速：110-130 rpm（建議使用帶擋板搖瓶）

• 傳代密度：0.8-1.2×10? cells/mL（以活細(xì)胞計(jì)數(shù)為準(zhǔn)）

2. 直接馴化

適用于多數(shù)已適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞系：

• 直接以      CW003 培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基，按日常傳代比例（如 1:3-1:5 稀釋）進(jìn)行換液，維持培養(yǎng)條件不變。

3. 漸進(jìn)式馴化

適用場(chǎng)景：貼壁培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)ε囵B(yǎng)基成分敏感的細(xì)胞系

注意事項(xiàng)：選擇低代次（≤10 代）、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（活力≥95%）的細(xì)胞進(jìn)行馴化。

• 階段①：

• 在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞，連續(xù)傳代 2-3 次至生長(zhǎng)穩(wěn)定。

• 采用混合培養(yǎng)基逐步過(guò)渡：原培養(yǎng)基：CW003 比例依次為 75:25→50:50→10:90，每代維持細(xì)胞密度 0.8-1.1×10? cells/mL，每 48 小時(shí)傳代一次。

• 階段②：

• 當(dāng)細(xì)胞在含≥90% CW003 的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)正常（倍增時(shí)間≤24 小時(shí)，活力≥92%），可wan全過(guò)渡至 100% CW003 培養(yǎng)基。

• 連續(xù)傳代       3-4 次，若細(xì)胞密度、活力及形態(tài)均保持穩(wěn)定，即完成馴化。

二、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 快速解凍：

• 從液氮中取出凍存管，立即浸入 37℃水?。ㄝp微晃動(dòng)），120 秒內(nèi)完成解凍，至管內(nèi)僅剩少量冰晶。

2.   換液重懸：

• 在生物安全柜中，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 50mL 無(wú)菌離心管，加入 10mL 預(yù)熱至 37℃的 CW003 培養(yǎng)基。

• 離心條件：175×g，5 分鐘，棄上清。

• 用       20-30mL 預(yù)熱培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至搖瓶，初始培養(yǎng)密度建議為 0.3-0.5×10? cells/mL。

三、細(xì)胞凍存

1. 細(xì)胞準(zhǔn)備

• 選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（活力≥98%）、狀態(tài)良好的細(xì)胞，計(jì)數(shù)后調(diào)整密度。

• 凍存密度：1.0-2.0×10? cells/mL（推薦 2.5-3.5×10? cells/mL 以提升復(fù)蘇效率）。

2. 凍存液配制（現(xiàn)用現(xiàn)配）

• 配方：45% 新鮮      CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細(xì)胞培養(yǎng)上清（原培養(yǎng)基） + 10% DMSO（體積比），充分混勻后置于 4℃預(yù)冷。

3. 操作步驟

• 離心收集細(xì)胞：175×g，5 分鐘，棄上清。

• 用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞，確保均勻無(wú)結(jié)塊。

• 分裝至無(wú)菌凍存管（1mL / 支），標(biāo)注細(xì)胞信息與凍存日期。

• 程序降溫：

• 將凍存管放入填充異丙醇的程序降溫盒（提前 4℃預(yù)冷），置于 - 80℃冰箱過(guò)夜（降溫速率約 1℃/ 分鐘）。

• 次日轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。

注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基開(kāi)封后需避光保存，建議 30 天內(nèi)用完，避免反復(fù)凍融。

2.   馴化、復(fù)蘇及凍存過(guò)程中，建議定期檢測(cè)細(xì)胞活力（臺(tái)盼藍(lán)染色法）與形態(tài)，確保細(xì)胞狀態(tài)符合實(shí)驗(yàn)要求。

3.   高密度培養(yǎng)時(shí)，需監(jiān)控溶氧（DO）與 pH 值，必要時(shí)通過(guò)補(bǔ)料或氣體調(diào)控維持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定。