細(xì)胞破碎的3種主要方法
1.勻漿器:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動(dòng),即可將細(xì)胞研碎。此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高,適用于量少和動(dòng)物臟器組織。較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌,較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細(xì)胞器,質(zhì)地堅(jiān)硬,易損傷勻漿閥,也不適合用該法處理。
2.組織搗碎:一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
3.研缽:多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料,研磨時(shí)常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
二、化學(xué)及生物化學(xué)法
1.自溶法:在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?,利用組織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法。此過程需較長時(shí)間,常用少量防腐劑如甲苯等防止細(xì)胞的污染。
2.化學(xué)滲透法:某些有機(jī)溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)合物有選擇地滲透出來。
3.酶溶法:利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等,將細(xì)胞壁分解,使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。
三、物理法
1.反復(fù)凍溶法:將待破碎的細(xì)胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
2.急熱驟冷法:將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細(xì)菌及病毒材料。