激光器

    激光器是激光誘導熒光檢測器的重要組成部分。

    激光作為熒光檢測器的理想光源，是因為它具有區(qū)別于普通光源的特性：

    ①單色性好，譜線寬度可達123 9 ’5 以下，使溶劑的瑞利散射光和拉曼散射光的帶寬降為1:2’5（拉曼散射光的固有帶寬），因而可選擇性地消除散射光對熒光信號的干擾。

    ②聚光性強，激光光束的發(fā)散角極小，可將激光束聚焦成直徑幾微米的光點，能量高度集中，因而可以使液相色譜檢測池體積減小，特別適用于目前正在發(fā)展的微型和毛細管液相色譜。

    ③重要的特性就是光子流量高，也就是亮度高，大大增強了光源的信號，從而顯著提高分析靈敏度。

    另外，用脈沖激光為光源，采用時間分辨技術可消除瑞利散射光和拉曼散射光對測定的干擾，同時增加被測成分之間測定的選擇性。以上這些特性使激光誘導熒光檢測器的信噪比大大增強，顯示出高的靈敏度和較好的選擇性。

    激光器的種類很多，已有數(shù)百種材料可以用來制造激光器，如氣體、晶體或玻璃、半導體和有機材料等，分別稱做氣體激光器、固體激光器、半導體激光器和有機染料激光器。此外，利用一定的裝置，可以使染料激光器發(fā)射出來的激發(fā)波長做連續(xù)的變化，這種激光器稱為可調諧激光器。半導體激光器和有機染料激光器都可用于可調諧激光器。一般激光器僅為線性光譜光源，可調諧激光器因為所發(fā)出的激發(fā)波長可以連續(xù)改變，所以作為光源具有區(qū)別于其它激光器的明顯優(yōu)點。激光器按發(fā)光方式的不同，可分為連續(xù)波和脈沖波激光器。連續(xù)波激光器具有良好的空間模式和空間指向性，功率輸出變動小于1%，而脈沖波激光器空間模式較差，功率輸出變動可達10%以上。

    用于液相色譜檢測器的激光器的選擇主要按以下原則：

    ①由于大多數(shù)激光器的發(fā)射光譜僅為一些分立的譜線，激光發(fā)射波長必須與所分析組分的吸收光譜相適合。如果需要進行熒光衍生反應，只需選擇與熒光衍生試劑吸收相應的激發(fā)波長即可對所有組分進行高靈敏檢測。此外，在選擇激光器時還要考慮溶劑拉曼散射的影響?？赏ㄟ^選擇激光器的激發(fā)波長或熒光衍生試劑使被測組分的熒光發(fā)射避開水的拉曼散射光（水的拉曼散射譜帶為270.2nm-322.5nm和606.06nm)。

    ②激光器要有良好的空間模式和空間指向性。

    ③激光器要有穩(wěn)定的功率輸出。激光輸出功率的穩(wěn)定性直接影響檢測器的靈敏度。輸出功率越穩(wěn)定，檢測器的噪聲越小，信嗓比越高。

    ④選擇適當功率的激光器。通常，提高激光激發(fā)功率，熒光信號和背景噪聲都會增強，但熒光強度與激光照射功率成正比，背景短的噪聲則與激光照射功率的平方根成正比。因此，從提高信噪比的角度，宜選擇功率較大的激光器。但另一方面，隨著照射功率的增強又會產生熒光飽和、熒光分子的光解、檢測池熱效應和基體背景熒光增加等不利因素，不可能無限度提高信噪比。因此必須綜合考慮各種因素的影響。

    目前，熒光檢測器常用的激光器有：He-Cd激光器、Ar離子激光器、Kr離子激光器、He-Ne激光器等。He-Cd連續(xù)波激光器是常用的LIF激光器，它在325nm和442nm處均有很好的熒光衍生試劑與之匹配，但是HE-Cd激光管的壽命較短，輸出穩(wěn)定性受環(huán)境影響較大，影響分析檢測靈敏度。Ar離子激光器和Kr離子激光器在270nm左右的紫外輸出可以使熒光效率很低的分子產生熒光，如某些含芳香環(huán)的蛋白質、多肽、氨基酸分子等。但具有紫外輸出的激光器體積較大、能耗高，價格昂貴。小功率的Ar離子激光器具有輸出功率穩(wěn)定、體積小、價格較低等特點而被較多的激光誘導熒光檢測系統(tǒng)采用，其主要輸出波長為488nm和514nm。近年來，He-Ne激光器也常用于熒光檢測器中。

    半導體激光器又稱二極管激光器，由于具有功率輸出穩(wěn)定、價格便宜、體積小、使用壽命長等優(yōu)點，成為激光誘導熒光檢測器的理想光源。近些年來，半導體激光技術得到很大發(fā)展。但是，商品半導體激光器的發(fā)射波長多在遠紅外區(qū)，短波長范圍在650nm-900nm之間的近紅外區(qū)。雖然近紅外區(qū)的背景熒光和拉曼散射的干擾小，樣品的光解少，但在此波長范圍內，很難找到與其相適合的熒光衍生化試劑，故發(fā)展前景不大。目前，生產廠商都在發(fā)展紫外半導體激光器，以期得到普遍應用。