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二手LCMS液質(zhì)聯(lián)用成為藥物代謝研究中的作用

閱讀:583        發(fā)布時間:2019-3-1

色譜分離模式多,適用范圍廣,是解決復雜體系中混合物分離分析的手段。但色譜對化合物的定性常常需要借助于標準品的對照才能進行保留值的定性和定量,因此色譜和各種光譜手段的聯(lián)用技術(shù)一直是研究重點。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用是20世紀70年代發(fā)展起來的分析技術(shù)。液相色譜是以液體溶劑作為流動相的色譜技術(shù),一般在室溫下操作,可以直接分析不揮發(fā)性化合物、極性化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等),分析范圍廣,而且不需衍生化步驟。據(jù)統(tǒng)計,在已知化合物中有70% 是不揮發(fā)性的,所以在生命科學、醫(yī)藥領(lǐng)域等方面有廣闊的應用潛力。質(zhì)譜是強有力的結(jié)構(gòu)解析工具,能為結(jié)構(gòu)定性提供較多的信息,是理想的色譜檢測器,不僅特異,而且具有*的檢測靈敏度。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將液相色譜分離技術(shù)與質(zhì)譜檢測手段相結(jié)合,集液相色譜(LC)的高分離能力和質(zhì)譜(MS)的高靈敏度、*的定性專屬特異性于一體,已成為體內(nèi)藥物代謝研究中不可替代的一種強有力的分離分析工具。

藥物代謝是指藥物進入體內(nèi)后經(jīng)體液、酶等的作用,進行氧化、還原、水解、結(jié)合等一系列生物化學反應的過程。藥物代謝的研究,包括藥物及其在各種復雜的樣品基質(zhì)(全血、血漿、尿、膽汁及生物組織)中代謝物的分離、結(jié)構(gòu)鑒定以及痕量分析測定。利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),不僅可以避免復雜繁瑣的分離純化代謝物樣品的工作,而且能分離鑒定以往難于辯識的痕量藥物代謝物,從而迅速方便地解決問題。因此,在探討藥物代謝特征、確定藥物代謝物結(jié)構(gòu)及代謝途徑與藥物及代謝物的藥理作用及毒副作用間的關(guān)系,即結(jié)構(gòu)代謝活性/毒性三者之間的相關(guān)性等藥物代謝研究方面,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已被開發(fā)并顯示出廣闊的應用前景。 

二手LCMS在藥物體內(nèi)代謝產(chǎn)物的樣品的獲得和預處理技術(shù)

代謝產(chǎn)物可以在給藥后由血、尿、糞便等體液及排泄物中獲得,或用含藥物的營養(yǎng)液灌流離體臟器與組織切片,以及藥液與肝微粒體酶等藥物代謝酶溫孵獲得。藥酶溫孵法可以獲得較大量的代謝物,但花費較大。藥物離體臟器灌流與組織切片法中的灌流液含內(nèi)源性物質(zhì)很少,較易分離制取代謝產(chǎn)物。自血、尿中獲得代謝產(chǎn)物方法較簡單,但所得樣品的量較少。

體內(nèi)藥物分析的樣品成分復雜,對分析測定干擾嚴重,因此,樣品的預處理是做好體內(nèi)藥物代謝研究的重要前提。液液萃取(LLE)和沉淀蛋白質(zhì)是目前常用的方法。液液萃取常用的溶劑有二氯甲烷、乙酸乙酯等。對于弱酸和弱堿性藥物及其體內(nèi)代謝物,通常需要加入緩沖液調(diào)節(jié)樣品的酸堿性,使藥物及其代謝物成為游離的酸或堿,以便能為溶劑所萃取。而沉淀蛋白質(zhì)法操作非常簡便,對于水溶性較大的藥物及其代謝物尤為重要。沉淀劑可以是某些陽離子、陰離子、中性鹽及有機溶劑。

固相萃取是近10年迅速發(fā)展起來的一種樣品預處理技術(shù),它是以液相色譜分離機理為基礎(chǔ),建立起來的分離與純化以及富集的方法。SPE處理樣品有許多引人注目的優(yōu)點:首先是其安全性,可以避免使用毒性較強或易燃的溶劑;其次是不會發(fā)生LLE中經(jīng)常出現(xiàn)的乳化問題,萃取回收率高,重現(xiàn)性好;第三,SPE操作簡便、快速,可同時進行批量樣品的預處理?;谏鲜鰞?yōu)點,SPE在體內(nèi)藥物及其代謝物的分析中應用極其廣泛。 

在各類藥物及其代謝產(chǎn)物分析中的具體應用LCMS在藥物代謝研究中除了可確定分子量之外,還可以根據(jù)特異性斷裂規(guī)律推導出重要部分結(jié)構(gòu)甚至是完整的結(jié)構(gòu)。其根據(jù)是由于多數(shù)藥物的代謝物保留了原形藥物分子的骨架結(jié)構(gòu),因此,代謝物可能與母體藥物具有相似的裂解規(guī)律,即失去一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征離子,利用LCMS可以迅速找到可能的代謝物,并鑒定出結(jié)構(gòu)。   

二手LCMS能夠在對生物樣品進行適當預處理的基礎(chǔ)上,不需獲得很好的色譜分離效果即可篩選檢測其中的微量組分。同時,LCMS技術(shù)的應用能減少分析方法建立以及樣品處理分析所用的時間,并且允許同時對多個成分進行定性、定量分析,在分析大量生物樣品時有很高的選擇性。

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