使用安捷倫液相色譜柱前要了解什么?
閱讀:731 發(fā)布時間:2020-3-24
在安捷倫液相色譜柱使用前要仔細閱讀色譜柱附帶的說明書,注意適用范圍,如pH值范圍、流動相類型等;必須使用保護柱;色譜柱長時間不用時,柱內應充滿溶劑,兩端封死保存。
溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎,在更換流動相時注意保護,當發(fā)現過濾頭變臟或長菌時,不可用超聲洗滌,可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌。
流動相使用前必須過濾,不要使用多日存放的蒸餾水。
檢測器的燈有使用壽命限制,一般在正式進樣分析前30min左右開啟D燈或W燈,分析結束,立即關燈。儀器運行時,泵頭必須用10%異丙醇水溶液虹吸沖洗,不能干涸。
注意各流動相所剩溶液的容積設定,若設定的容積低于zui低限會自動停泵。
對于手動進樣器當使用緩沖溶液時要用水沖洗進樣口同時搬動進樣閥數次每次數毫升
若使用含鹽流動相,開機時必須先用10%甲醇水溶液沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相。
在使用安捷倫液相色譜柱之前,還要先了解樣品和雜質的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等相關內容。
樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱,缺點是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗。
如果樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質,且硅膠端基封尾)或一些經過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留。
如果堿性化合物的酸性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單,缺點是目前實現這一技術的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱,選擇強離子交換柱,也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。