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初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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食品安全檢測(cè)試劑盒解決方案

時(shí)間:2020/7/16閱讀:269
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Elisa生物檢測(cè)是一種敏感度高,同時(shí)特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

目前市面上的Elisa試劑盒檢測(cè)原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競(jìng)爭(zhēng)法。

  四種Elisa檢測(cè)方法由于其檢測(cè)原理各有優(yōu)劣:

 

優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)

直接法

1.操作簡(jiǎn)便
2.消除了二抗交叉反應(yīng)

1.一抗由于添加標(biāo)簽免疫活性降低
2.標(biāo)記一抗耗時(shí)且昂貴
3.沒(méi)有產(chǎn)生信號(hào)放大

間接法

1. 一抗的*大免疫反應(yīng)性得以保留
2. 高靈敏度,信號(hào)放大

1. 二級(jí)抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng),產(chǎn)生非特異性信號(hào)
2. 需要額外的孵育步驟

夾心法

1.特異性,靈敏度高
2.適合復(fù)雜的樣本

1.檢測(cè)時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間增加
2.步驟繁瑣

競(jìng)爭(zhēng)法

1. 通過(guò)觀察預(yù)期信號(hào)輸出中的干擾來(lái)測(cè)量樣本中抗原(或抗體)的濃度。
2. 常用于分析物較小,不能同時(shí)跟兩種不同的抗體結(jié)合。

1.計(jì)算不太直觀
2.總體敏感性和特異性較低。

通常我們?cè)谶x擇所需要的Elisa試劑盒時(shí)主要會(huì)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行選擇:

Elisa試劑盒選擇原則:

指標(biāo)

選項(xiàng)

樣本類型

人,小鼠,大鼠

檢測(cè)指標(biāo)的類別

·多表位的大蛋白:夾心ELISA
·小分子:競(jìng)爭(zhēng)ELISA

檢測(cè)需求

定性或定量

靈敏度

低濃度的物質(zhì)需選擇高靈敏度檢測(cè)方式

樣本體積

珍貴的樣本用少量的體積

回收率和線性

·靈敏度
·動(dòng)態(tài)范圍
·標(biāo)準(zhǔn)曲線

檢測(cè)系統(tǒng)

比色法,熒光法,發(fā)光法

其他優(yōu)勢(shì)

協(xié)議簡(jiǎn)單,操作方便,實(shí)驗(yàn)時(shí)間短

Elisa試劑盒質(zhì)量到底怎樣?檢測(cè)結(jié)果的可信度高不高?

Elisa試劑盒評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):

      ① 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,應(yīng)大于等于0.9900。

      ② 靈敏度:反應(yīng)試劑盒的*低檢測(cè)濃度

      ③ 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

      ④ 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)

      ⑤ 回收率:判斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性

Elisa試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線:

標(biāo)曲R值是幾個(gè)9才合格?

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(方法)的要求使用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。所用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)覆蓋被測(cè)樣品的濃度范圍。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(方法)如無(wú)具體的要求,至少使用5個(gè)標(biāo)樣(除空白外)建立線性標(biāo)準(zhǔn)曲線,每個(gè)點(diǎn)重復(fù)測(cè)定1-3次,對(duì)于篩選方法,線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98,對(duì)于確證方法,相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。

其實(shí),大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),實(shí)際應(yīng)用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測(cè)結(jié)果只用接近*高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準(zhǔn)確,如果線性大于0.999的話,在整個(gè)線性范圍內(nèi)都會(huì)有一個(gè)比較滿意的結(jié)果。

如果檢測(cè)的線性不好,可以減少標(biāo)準(zhǔn)的覆蓋范圍,將標(biāo)準(zhǔn)的濃度調(diào)整到待測(cè)樣品濃度附近,這樣結(jié)果也是非常準(zhǔn)確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,但線性非常不理想,這時(shí)可以將標(biāo)準(zhǔn)范圍調(diào)整到15~25ppb之間,作五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

可以檢測(cè)檢測(cè)各類食品,飼料,組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細(xì)菌蛋白的ELISA試劑盒:

1.抗生素類:氨芐青霉素,E4350,樣本:血清,尿液,牛奶,組織

檢測(cè)食品中抗生素的殘留

樣本類型:組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本

真菌毒素是真菌產(chǎn)生的低分子量次級(jí)代謝產(chǎn)物2.真菌毒素:總黃丨曲素,E4747,樣本:酒、醬油、醋、谷物、花生、
配方飼料、食用油

樣品類型:玉米、谷物、花生、大米、大豆等。

食品受到生物和環(huán)境污染物的污染發(fā)生在生產(chǎn)和加工的幾個(gè)階段3.食品添加劑: 沙丁胺醇,K4209,樣本:豬尿、組織、飼料

樣品類型:牛奶、肉類、玉米、谷物、花生、大米、大豆,等。

表達(dá)蛋白經(jīng)過(guò)幾個(gè)純化步驟后,宿主細(xì)胞蛋白仍然可以以較高濃度存在,甚至?xí)c原料藥一起純化和濃縮;樣品類型:細(xì)胞裂解液、其他生物液

4.宿主細(xì)胞蛋白:CHO 宿主細(xì)胞蛋白,E4537,樣本:細(xì)胞裂解液,其他生物液體

5.其他毒素:雙酚A(BPA),E4722,樣本:細(xì)胞裂解液,其他生物液體

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