雙鏈特異性DNA酶化學(xué)性質(zhì)&使用說明

dsDNA酶是一種核酸內(nèi)切酶，它切割DNA中的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生具有5'-磷酸和3'-羥基的寡核苷酸。dsDNA酶特異性地消化雙鏈DNA（dsDNA），而不消化單鏈DNA、引物、探針和RNA。dsDNA酶是熱敏的，在55°C時可快速失活。它主要用于在逆轉(zhuǎn)錄實驗之前快速去除RNA樣本中的基因組DNA污染。與使用DNA酶I去除基因組DNA污染的傳統(tǒng)方法相比，dsDNA酶不需要額外的EDTA來滅活，減少了RNA損傷，節(jié)省了實驗時間，并確保了RNA水平的準(zhǔn)確定量。

艾美捷雙鏈特異性DNA酶：

Cat #: C-BSM0206

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

酶活性定義：

根據(jù)Kunitz測定方法，在25°C的pH 5.0下，當(dāng)使用過量的高分子量DNA作為底物，酶活性在每分鐘260 nm處導(dǎo)致吸光度增加0.001時，酶活性定義為1個單位（U）。

儲存緩沖液：

25 mM Tris-HCl（pH 7.5，在25°C下）、2.0 mM MgCl2、10 mM NaCl、0.01%（v/v）Triton X-100、50%（v/v）甘油。

抑制和滅活

抑制作用：金屬離子、EDTA、SDS、DTT、β-巰基乙醇、高鹽離子濃度等均可抑制

dsDNA酶。

滅活：在55°C下培養(yǎng)5分鐘。

質(zhì)量控制

蛋白質(zhì)純度

經(jīng)SDS-PAGE和考馬斯亮藍(lán)染色測定，酶純度≥90%。

RNA核酸酶活性

將酶與RNA底物在37°C下孵育1小時，并進行凝膠電泳以確認(rèn)RNA底物的節(jié)點降解。

功能測試

該產(chǎn)品測試了從RNA樣品中去除基因組DNA和隨后的RT-qPCR擴增，顯示去除率≥99.9%。RNA的數(shù)量不受dsDNA酶處理的影響。

雙鏈特異性DNA酶使用說明：

1.在冰上按如下方式制備反應(yīng)混合物：

2.輕輕拍打并混合反應(yīng)混合物，然后將混合物在37°C下孵育2-5分鐘。

3.在65°C下加熱滅活2分鐘，并迅速將獲得的RNA放在冰上進行后續(xù)實驗。對于長期儲存，應(yīng)在-80°C下儲存，避免重復(fù)凍融循環(huán)

備注

1.如果RNA樣品的下游應(yīng)用是RT-PCR，并且靶基因長度≥3kb，則在滅活步驟之前添加最終濃度為10mM的DTT。

2.為了防止RNA降解，在反應(yīng)混合物中加入適量的RNase抑制劑。

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。