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PKH26細(xì)胞連接試劑盒(用于通用細(xì)胞膜標(biāo)記)是一種基于熒光探針PKH26的測試試劑盒,用于通用細(xì)胞薄膜標(biāo)記。它適用于體外細(xì)胞標(biāo)記、體外細(xì)胞增殖和長期細(xì)胞追蹤研究。PKH26是一種獲得磚利的具有長疏水性尾部的膜標(biāo)記探針,可以穩(wěn)定地插入細(xì)胞膜的肽區(qū)。PKH26熒光在黃橙色光譜范圍內(nèi),最大激發(fā)波長為551nm,最大發(fā)射波長為567nm。它與羅丹明或PE檢測系統(tǒng)兼容。它也可以用標(biāo)準(zhǔn)熒光素過濾器激發(fā),但是熒光強度可能被輕微地降低。PKH26具有最長的體內(nèi)半衰期,超過100天,非常適合體內(nèi)細(xì)胞跟蹤、細(xì)胞增殖研究和其他長期實驗。此外,PKH26染料已在體外和體內(nèi)跟蹤實驗中成功用于標(biāo)記染色體和細(xì)胞外小泡。
艾美捷PKH26紅色熒光細(xì)胞鏈接試劑盒(外泌體染色)基本參數(shù):
目錄號:B-CHK104
規(guī)格:0.1 mL
儲存:室溫
PKH26紅色熒光細(xì)胞鏈接試劑盒(外泌體染色)一般細(xì)胞膜標(biāo)記程序分析:
親脂性染料結(jié)合到細(xì)胞膜上進(jìn)行標(biāo)記。染色強度是染料濃度和細(xì)胞濃度的函數(shù),與滲透性無關(guān)。因此,確保適量的染料對于避免過度標(biāo)記至關(guān)重要,這可能導(dǎo)致細(xì)胞膜完整性的喪失或細(xì)胞活力的降低。
以下程序可用于在體外和體內(nèi)標(biāo)記細(xì)胞,包括干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元或任何其他類型的細(xì)胞。體內(nèi)細(xì)胞的標(biāo)記過程可能需要進(jìn)行某些修飾,如血小板染色或吞噬細(xì)胞的選擇性標(biāo)記。
在下面的染色過程中,細(xì)胞濃度和染料濃度表示該過程中使用的初始濃度。這些濃度已被證明適用于各種細(xì)胞類型。用戶應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康?,通過評估染色后細(xì)胞活力(如PI染色)、熒光強度、染色均勻性以及是否影響所研究細(xì)胞的功能,確定最佳染料濃度和細(xì)胞濃度。
注1:在PKH26染色過程中,不應(yīng)存在疊氮化物或代謝毒性物質(zhì)。
注2:雖然粘附細(xì)胞也可以染色,但單個懸浮細(xì)胞可以獲得更好的染色均勻性。因此,對于粘附細(xì)胞,建議使用抑肽酶(胰蛋白酶/EDTA)將其消化成單個懸浮細(xì)胞,以獲得更好的染色結(jié)果。
以下程序的最終體積為2 mL,PKH26濃度為2×10-6 M,細(xì)胞濃度為1×107個細(xì)胞/mL。以下所有步驟均在室溫(20-25°C)下進(jìn)行。
1.將含有2x107個單細(xì)胞的懸浮液置于錐形底部聚丙烯管中,并使用不含血清的培養(yǎng)基沖洗。注:血清蛋白質(zhì)和脂質(zhì)也會與染料結(jié)合,從而降低可用于膜粘合的有效濃度。在用DiluentC重懸用于標(biāo)記(步驟4)之前,用無血清培養(yǎng)基或緩沖液洗滌一次(步驟1)可獲得最佳結(jié)果。
2.將細(xì)胞(400x g)離心5分鐘,形成松散的顆粒。注意:PKH26乙醇染料溶液不應(yīng)直接添加到細(xì)胞沉淀中。這將導(dǎo)致異質(zhì)性表達(dá)和細(xì)胞活力降低。
3.離心細(xì)胞后,仔細(xì)吸取上清液,注意不要去除任何細(xì)胞,而是留下25μL的上清液。注:為了獲得可重復(fù)的結(jié)果,當(dāng)細(xì)胞懸浮在稀釋劑C中時,重要的是盡量減少殘留培養(yǎng)基或緩沖液的量。
4.通過向細(xì)胞沉淀中加入1mL稀釋劑C制備2x細(xì)胞懸浮液,并用溫和移液管重懸以確保完-全分散。不要渦旋,也不要讓細(xì)胞長時間停留在稀釋劑C中。注意:生理鹽的存在會導(dǎo)致染料形成膠束,并大大降低染色效率。因此,重要的是在添加染料時將細(xì)胞懸浮在稀釋劑C中,而不是懸浮在培養(yǎng)基或緩沖液中。
5.染色前,通過在聚丙烯離心管中向1 mL稀釋劑C中加入4μL PHH26乙醇染料溶液,在稀釋劑C中制備2倍染料溶液(4x10–6 M),并充分混合以分散。
注1:為了最大限度地減少乙醇對細(xì)胞活力的影響,步驟5中添加的染料體積應(yīng)在步驟6結(jié)束時產(chǎn)生不超過1-2%的乙醇。
注2:如果需要最終染料濃度為2x10–6 M,則通過用未變性的100%乙醇稀釋試劑盒中提供的PKH26乙醇染料溶液來制備中間染料原液,將獲得最-具重現(xiàn)性的結(jié)果。
6.將1mL的2x細(xì)胞懸浮液(步驟4)快速添加到1mL的2x染料溶液(步驟5)中,并立即通過移液管將樣品擠出?;旌现甘倔w積后的最終濃度為1x107細(xì)胞/mL和2x10–6MPKH26
注:由于染色幾乎是即時的,細(xì)胞在染料溶液中快速均勻的分散對于正確、均勻和可重復(fù)的標(biāo)記至關(guān)重要。
該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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