EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒樣品制備&操作步驟

T4是診斷甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進(jìn)的有用標(biāo)志物。甲狀腺素T4在甲狀腺功能減退患者中水平降低，在甲狀腺功能亢進(jìn)患者中水平升高。血液中的主要甲狀腺激素形式是甲狀腺素（T4），其半衰期比T3長(zhǎng)。T4在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)去碘酶（5'-碘酶）轉(zhuǎn)化為活性T3（比T4更具效力的三到四倍）。這些進(jìn)一步經(jīng)過(guò)脫羧和脫碘反應(yīng)，產(chǎn)生碘代胺（T1a）和甲狀腺胺（T0a）。去碘酶的三個(gè)同功酶都是含硒酶，因此膳食中的硒對(duì)T3的產(chǎn)生至關(guān)重要。Edward Calvin Kendall于1915年首-次分離出甲狀腺素。EZElisa™ Thyroxine (T4) ELISA Kit采用競(jìng)爭(zhēng)性抑制酶免疫測(cè)定技術(shù)。試劑盒中提供的微孔板已經(jīng)預(yù)涂有特異性抗T4的抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與生物素結(jié)合的T4加入相應(yīng)的微孔板孔中，T4（標(biāo)準(zhǔn)品或樣品）與預(yù)涂的特異性抗體結(jié)合的生物素結(jié)合的T4之間會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)。樣品中T4的含量越多，與生物素結(jié)合的T4結(jié)合的抗體越少。洗滌后，加入Avidin-HRP到孔中。加入底物溶液后，顏色的發(fā)展與樣品中T4的含量相反。停止顏色的發(fā)展并測(cè)量顏色的強(qiáng)度。

艾美捷EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒基本參數(shù)：

目錄號(hào)：D-AEK0007

規(guī)格：48T/96T

儲(chǔ)存：未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)在4°C下保存12個(gè)月。

檢測(cè)范圍：20 ng/mL-320 ng/mL

靈敏度：10 ng/mL

特異性：EZElisa™ Thyroxine (T4) ELISA Kit對(duì)T4的檢測(cè)具有高靈敏度和優(yōu)異的特異性。未觀察到T4與類似物之間的顯著交叉反應(yīng)或干擾。

適用樣品：血清、血漿

供應(yīng)材料和儲(chǔ)存條件：

Note: Std1: 20 ng/mL; Std2: 40 ng/mL; Std3: 80 ng/mL; Std4: 160 ng/mL; Std5: 320 ng/mL.

EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒試劑制備：

注意：在使用前，將所有試劑平衡至室溫。如果緩沖液濃縮物中出現(xiàn)結(jié)晶，請(qǐng)輕輕加熱它們直到完-全溶解。1×洗滌緩沖液：將洗滌緩沖液（20×）用去離子水稀釋1：20，得到1×洗滌緩沖液。儲(chǔ)存在4°C。

樣品制備：

1. 血清：使用血清分離管，在室溫下使樣本凝結(jié)30分鐘，然后以1,000 g的速度離心15分鐘。立即取出血清進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)颖痉盅b并儲(chǔ)存在-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

2. 血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸作為抗凝劑采集血漿。在采集后30分鐘內(nèi)以1,000 g的速度離心15分鐘。立即進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)颖痉盅b并儲(chǔ)存在-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

注意：不要使用明顯溶血或脂質(zhì)混濁的樣本。如果樣本將在24小時(shí)內(nèi)使用，可以儲(chǔ)存在2至8°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。在進(jìn)行檢測(cè)之前，應(yīng)將冷凍樣本緩慢恢復(fù)至室溫，并輕輕混合。

EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒操作步驟：

1. 從板框中取出多余的微孔條，放回含有干燥劑包裝的鋁箔袋中，并重新密封。

2. 每個(gè)孔加入50 μL的T4標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。建議將所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣本都復(fù)制加入微孔板中。設(shè)置一個(gè)空白孔，不加入任何溶液。

3. 向每個(gè)孔中加入50 μL的生物素結(jié)合的T4（不加入空白孔）。充分混合后，用提供的孔板蓋覆蓋，然后在37°C下孵育1小時(shí)。

4. 倒出每個(gè)孔中的液體并進(jìn)行洗滌，總共洗滌三次。使用多通道移液器或自動(dòng)微孔板洗滌器，將每個(gè)孔填滿1×洗滌緩沖液（250 μL），靜置10秒鐘，每個(gè)步驟完-全去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。在最后一次洗滌后，倒轉(zhuǎn)孔板并用干凈的紙巾輕輕擦干任何剩余的1×洗滌緩沖液。

5. 向每個(gè)孔中加入50 μL的親和素-HRP（不加入空白孔），充分混合后，用提供的孔板蓋覆蓋。在37°C下孵育30分鐘。

6. 重復(fù)第4步中的洗滌步驟。

7. 向每個(gè)孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混合后，用提供的孔板蓋覆蓋。在37°C下孵育15分鐘。將孔板放在無(wú)風(fēng)處并避免光照。

8. 向每個(gè)孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液應(yīng)按照HRP底物的順序加入孔板中?？字械念伾珣?yīng)從藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果孔中的顏色是綠色，或者顏色變化不均勻，請(qǐng)輕輕敲擊孔板以確保充分混合。

9. 在30分鐘內(nèi)使用設(shè)置為450 nm的微孔板讀取器測(cè)定每個(gè)孔的吸光度。

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。